论文部分内容阅读
研究背景:男性不育发病率逐年升高,已成为全球性的健康问题。男性不育症发病机制复杂,可由先天或继发性泌尿生殖系统异常、生殖腺感染、内分泌紊乱、精索静脉曲张、线粒体功能障碍或免疫紊乱等因素导致,其中特发性不育患者约占40%,其分子机制尚不完全清楚。目前临床上对男性不育的诊断主要基于精液常规和生化指标,然而这些检测缺乏较高的诊断特异性和敏感性,也忽略了男性不育的内在机制。睾丸活检虽然对男性不育,尤其是无精子症的诊断具有较高的准确性,但穿刺活检属有创性,可能引发并发症。因此,临床上仍需探寻男性不育症的新型非侵入性诊断标志物。最新研究表明精浆含有大量外泌体,来源于男性生殖系统多种细胞,由于精浆外泌体中mi RNA的含量会伴随外泌体起源细胞变化而改变,因此它能更精确反映生殖器官的病理生理变化,可作为潜在可靠的生物标志物。有报道显示,mi RNA在精子发生过程中发挥重要生理功能,但其在不育症精浆外泌体中的变化情况目前未见全面系统的报道。目的:全面系统地检测男性不育患者精浆外泌体mi RNA的表达谱,鉴定出在男性不育患者中显著改变的mi RNA,评价其作为辅助诊断男性不育生物标志物的可能性。方法:分别收集108例无精症、108例弱精症和108例年龄相匹配的正常男性精浆标本作为研究对象。利用UMI绝对定量转录组测序技术对精浆外泌体中的mi RNA测序分析,初步筛选出男性不育患者中显著变化的mi RNA。然后用试剂盒对所有精浆样本逐一提取外泌体,运用实时荧光定量PCR技术在复筛组和验证组中进行个体验证。最后运用ROC曲线分析、Spearman相关性分析及Logistic回归分析评价筛选出的mi RNA对男性不育症的辅助诊断价值。结果:UMI绝对定量转录组测序结果显示,与对照组相比,男性不育患者精浆外泌体mi RNA表达谱发生了明显改变。运用q RT-PCR技术进行复筛和验证,发现5种mi RNA(mi R-891a-3p、mi R-890、mi R-891b、mi R-892b、mi R-202-5p)在无精症患者精浆外泌体中显著稳定下调,2种mi RNA(mi R-7-5p和mi R-378e)在弱精症患者精浆外泌体中显著稳定上调(变化倍数≥2,P<0.05)。ROC曲线分析显示,7种mi RNA诊断男性不育症的ROC曲线下面积(AUC)为0.686~0.778,其中mi R-892b的诊断准确性最高。进一步对这几种mi RNA进行Risk score分析,结果表明3-mi RNA(mi R-891b、mi R-892b、mi R-202-5p)组合的AUC值为0.785(95%CI:0.721~0.850),对无精症具有较高的诊断准确性;弱精症中mi R-7-5p和mi R-378e组合的AUC也高于单个mi RNA。此外,Spearman相关性分析显示,5种在无精症患者精浆外泌体中显著下调的mi RNA与精子浓度和精子活力呈显著正相关,而2种在弱精症患者精浆外泌体中显著上调的mi RNA与精子活力呈显著负相关。单因素逻辑回归分析显示,这些mi RNA均与男性不育症相关,是其潜在的危险因素(B>0,OR>1,P<0.05)。结论:男性不育症患者精浆外泌体mi RNA表达谱与正常对照相比存在显著差异,其中7种mi RNA在男性不育症患者精浆外泌体中发生了显著变化,这些mi RNA有望作为男性不育潜在的辅助诊断指标。