论文部分内容阅读
前言近年来,Edmondon方案的提出及随后的国际多中心试验证明了胰岛移植的有效性及临床应用价值。获取供胰时进行的原位灌注可致胰腺灌注损伤,表现为胰腺水肿、变硬等,应用此类供体进行胰腺移植可致术后胰腺炎的发生,使其成为边缘供体。作为胰岛移植供体,其对胰岛分离纯化及功能有无影响尚未明确。本实验即对胰腺灌注损伤对大鼠胰岛分离、纯化及功能影响进行研究。材料和方法Wistar人鼠(雌雄不限),64只,体重200g-250g,随机分组。10%水合氯醛腹腔麻醉,全身肝素化后腹主动脉插管灌注,灌注液为4℃肝素林格氏液,制作不同程度灌注损伤模型。取灌注后的胰腺组织测定含水量,进行形态学观察(包括大体观察、光镜观察及电镜观察)。进行胰岛分离、纯化及功能检测。采用胆管内灌注胶原酶法行大鼠胰岛分离。分离后反复清洗、低温离心,去除上清液,沉淀物为胰岛细胞和外分泌腺的混合物。大鼠胰岛纯化采用不连续密度梯度法,介质为浓度分别为25%、23%、20.5%、11%的Ficoll液。纯化后的胰岛备用。胰岛双硫腙染色,倒置显微镜下观察并计数胰岛。镜检胰岛量与外分泌组织量之比估计纯度。采用丫啶橙/溴乙啶荧光染色法显示细胞活率。胰岛功能测定采用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验计算胰岛素释放指数。统计学处理采用SPSS13.0软件,数据用均值±标准差表示,两组间差异的比较使用t检验,以P<0.05为有统计学意义。结果对照组胰腺颜色苍白,灌注良好,未见水肿。Ⅰ组胰腺可见轻度水肿,腺叶结构清晰可辨。Ⅱ组胰腺水肿较明显,可分辨腺体组织分叶。Ⅲ组胰腺严重水肿,无法辨认组织结构。光镜下对照组胰岛形态正常,包膜完整,细胞间隙正常。Ⅰ组胰岛形态正常,包膜完整,细胞间隙可见轻微水肿扩张。Ⅱ组胰岛绝大多数形态正常,偶见受损胰岛,细胞间隙扩张,有炎性细胞浸润。Ⅲ组可见部分胰岛破碎,间隙水肿扩张明显,大量炎性细胞浸润。电镜下只有Ⅲ组可见细胞细微结构受到明显影响。Ⅱ组,Ⅲ组胰腺组织含水量升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.001)。胰岛的产量、纯度、活度及功能均只有Ⅲ组与对照组比较有统计学意义(P<0.001)。结论1、胰腺轻、中度灌注损伤造成胰腺轻、中度水肿,对大鼠胰岛分离、纯化及功能无明显影响。2、重度灌注损伤造成胰腺重度水肿,对大鼠胰岛分离、纯化及功能产生明显负面影响,此类胰腺不适合进行胰岛分离。