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第一部分缺氧缺糖模型建立及甲酯化脂氧素A4浓度选择目的:建立人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y缺氧缺糖（OGD）损伤模型,确定细胞缺氧时间及选择对SH-SY5Y细胞OGD损伤起保护作用的最佳甲酯化脂氧素A4（lipoxin A4methyl ester,LXA4ME）浓度。方法:细胞培养:SH-SY5Y神经细胞在含有10%胎牛血清,青霉素（100μg/ml）和链霉素（100μg/ml）的DMEM/F12完全培养基中于37℃、5%CO2培养箱中培养。细胞每2-3天传代培养。倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,至80%-90%以上融合,即可用于后续实验。SH-SY5Y细胞OGD损伤模型的制作:选用对数生长期生长良好的SH-SY5Y细胞,置换成无糖无血清DMEM培养基孵育,放入37℃三气培养箱（5%CO2、1%O2、94%N2）中培养2h、4h、6h、8h、10h、12h,CCK8检测法测定细胞存活率以选择最佳缺氧时间。甲酯化脂氧素A4浓度选择:1)选用对数生长期生长良好的SH-SY5Y细胞,加入LXA4ME终浓度分别为0、10、50、100、200、400 nmol/L的DMEM/F12完全培养基置于37℃、5%CO2培养箱中培养24h,CCK8检测法测定细胞存活率。2)选用对数生长期生长良好的SH-SY5Y细胞,分为对照组（control）、模型组（OGD）、LXA4ME处理组（药物浓度:10、50、100、200、400 nmol/L）。正常对照组细胞在无血清含糖DMEM/F12培养基中于37℃、5%CO2培养箱中培养6h;模型组细胞更换无糖无血清的DMEM培养基,LXA4ME处理组更换不同浓度LXA4ME（10、50、100、200、400 nmol/L）无糖无血清DMEM培养基,均置于37℃三气培养箱（5%CO2、1%O2、94%N2）中缺氧培养6h。CCK8检测法测定细胞存活率以选择最佳LXA4ME作用浓度。结果:1.CCK8检测结果显示随着SH-SY5Y细胞OGD时间的延长,细胞存活率逐渐下降。2.CCK8检测结果显示LXA4ME对SH-SY5Y细胞无损伤作用,不同浓度的LXA4ME处理OGD损伤的SH-SY5Y细胞,细胞存活率均显著升高。当LXA4ME浓度为100nmol/L时,细胞存活率最高。结论:SH-SY5Y细胞OGD损伤模型成功建立,缺氧时间确定为6h,LXA4ME最佳作用浓度为100nmol/L。第二部分甲酯化脂氧素A4对SH-SY5Y细胞缺氧缺糖损伤的保护作用目的:观察LXA4ME对SH-SY5Y细胞OGD损伤的氧化应激和细胞活性的影响。方法:选用LXA4ME浓度分别为10nmol/L、100nmol/L处理OGD损伤的SH-SY5Y细胞。实验分组:对照组（control）、模型组（OGD）、LXA4ME 10nmol/L组、LXA4ME 100nmol/L组。硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛（MDA）水平,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活力。Western blot法检测细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果:1.与对照组相比,OGD诱导SH-SY5Y细胞MDA含量明显升高（P＜0.01）。而细胞内抗氧化酶SOD活力显著下降（P＜0.01）。和模型组相比,LXA4ME可明显减少细胞MDA含量LXA4ME 10nmol/L组（P＜0.05）、LXA4ME 100nmol/L组（P＜0.01）,显著增强SOD活力（P＜0.01）。同LXA4ME 10nmol/L组相比,LXA4ME 100nmol/L组细胞MDA含量下降及SOD活力升高更为明显（P＜0.05）。2.Western blot结果显示与对照组相比,OGD诱导SH-SY5Y细胞后Bax蛋白表达明显增高,且Bcl-2/Bax比值显著下降（P＜0.01）。和模型组相比,LXA4ME（10nmol/L,100nmol/L）显著逆转了OGD损伤SH-SY5Y细胞中Bax蛋白的表达变化,升高了Bcl-2/Bax比值（P＜0.05,P＜0.01）。且同LXA4ME 10nmol/L组相比,LXA4ME 100nmol/L组细胞Bcl-2/Bax比值升高更为明显（P＜0.01）。结论:LXA4ME通过抗氧化应激、抑制细胞凋亡减少SH-SY5Y细胞OGD损伤。第三部分甲酯化脂氧素A4通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对SH-SY5Y细胞缺氧缺糖损伤的保护机制研究目的:分析PI3K/Akt/Nrf2信号通路在LXA4ME保护OGD损伤SH-SY5Y细胞中的作用。方法:在第二步基础上加入10μmol/L的PI3K抑制剂LY294002。实验分组:对照组（control）、模型组（OGD）、LXA4ME 100nmol/L组、LXA4ME 100nmol/L+LY294002组。CCK8检测细胞存活率,硫代巴比妥酸法检测细胞MDA水平,羟胺法检测细胞SOD活力。Western blot法检测相关蛋白p-Akt、p-Nrf2、HO-1及凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达变化。结果:1.CCK8检测结果显示当LXA4ME 100nmol/L组细胞加入PI3K抑制剂LY294002后,LXA4ME对SH-SY5Y细胞的保护作用减弱,使细胞存活率显著下降（P＜0.01）。2.PI3K抑制剂LY294002逆转了LXA4ME对OGD损伤SH-SY5Y细胞中SOD的活力（P＜0.01）和MDA含量水平（P＜0.01）的影响。3.Western blot结果显示OGD损伤的SH-SY5Y细胞p-Akt、p-Nrf2、HO-1、Bax蛋白水平升高（P＜0.01）,Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.01）,LXA4ME使该趋势得到了明显的逆转（P＜0.01）。而加入LY294002后,抑制了LXA4ME的作用（P＜0.01）。结论:LXA4ME保护OGD损伤SH-SY5Y细胞可能与PI3K/Akt/Nrf2信号通路有关。