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目的:采用多种表征手段,探索天然蛋白交联剂对增强牙本质粘接强度的作用及初步阐明其相关机制,为天然交联剂在牙本质粘接领域的实际临床应用提供新思路和基础支持。方法:1.通过微剪切粘接强度实验测试牙本质粘接界面不同牙本质小管方向对牙本质-树脂粘接强度的影响;FTIR、拉曼、Golden Staining染色及ESEM探讨混合层质量对牙本质-树脂粘接强度及耐久性的影响。2.明确影响牙本质粘接强度的主要结构因素后,使用不同浓度天然交联剂GSE-PA对比人工交联剂GA处理脱矿后牙本质胶原纤维蛋白,ESEM及TEM观测处理后牙本质试件抗酶降解的情况;微拉伸实验测试交联剂处理后牙本质试件机械性能变化,称重法对比GSE-PA与GA保护脱矿后牙本质胶原纤维抗酶降解的能力;FTIR观测GSE-PA与I型胶原纤维发生交联反应的位点。3.使用MALDI-TOF及称重法明确GSE-PA各成分交联胶原纤维蛋白的情况,筛选出新的天然交联剂TFs,ESEM及TEM对比其与GSE-PA在同等浓度(4 wt%)及处理时间(30 s)下对脱矿后牙本质胶原纤维蛋白保护效果;微剪切粘接强度测试低浓度GSE-PA和TFs,对比高浓度GA快速预处理牙本质粘接界面后对牙本质-树脂即刻和长期粘接强度的影响。结果:1.牙本质中小管方向在全酸蚀(Etch-and-rinse)粘接技术中对牙本质-树脂间的粘接强度影响更大;无论使用全酸蚀(Etch-and-rinse)粘接技术或自酸蚀(Self-etch)粘接技术,在浅层牙本质形成的粘接混合层质量均明显好于在深层牙本质形成的混合层。2.浓度在3.75 wt%以上的GSE-PA处理脱矿后牙本质5 s即可提高脱矿后牙本质胶原纤维蛋白抵抗蛋白分解酶的能力,尤其是GSE-PA在浓度3.75 wt%、处理时间为30 s时最佳,对脱矿后牙本质胶原纤维蛋白的保护能力优于10 wt%浓度的GA处理30 s;微拉伸实验测试3.75 wt%GSE-PA处理脱矿后牙本质试件抗微拉伸强度能力明显高于对照组(不处理组),且趋势随处理时间变长而增强,差别具明显统计学意义(P<0.05),称重法显示对照组重量酶降解后明显减少,差别具统计学意义(P<0.05)。使用GSE-PA处理后再经酶降解的试件组失重不明显,酶降解前后重量差别不具统计学意义(P>0.05)。经GSE-PA处理8 h不经酶降解及经酶降解2 h组,重量实际上有明显增加;FTIR观测结果显示,GSE-PA与脱矿后的牙本质I型胶原纤维蛋白发生了交联反应,反应位点分布在蛋白质的多个官能团,主键为C=O、C-N及N-H。3.MALDI-TOF及称重法明确GSE-PA复合物中能与蛋白质发生交联反应的具体亚成分,其中高分子量成分PAHM保护脱矿后牙本质胶原纤维不被酶降解的能力最强,颜色也最深,能力排序为:EGCG<PALM<GSE-PA<PAHM;ESEM、TEM观测新筛选出的颜色明显浅于GSE-PA的茶黄素复合物TFs同样具有能够在浓度4 wt%、作用时间30 s条件下,与脱矿后牙本质胶原纤维蛋白发生交联反应、增强其抵抗酶降解的能力,将4 wt%GSE-PA及TFs作为粘接前处理剂,处理牙本质粘接界面30 s后,能够明显增加牙本质-树脂间的即时粘接强度(P<0.05)且此粘接强度6个月后无明显下降(P>0.05),两者能力均优于对照组及10 wt%GA处理30 s组。结论:决定牙本质粘接强度及粘接长效性的关键因素为混合层的质量及稳定性;低浓度天然交联剂GSE-PA及TFs能够快速交联脱矿后牙本质胶原纤维蛋白,增加其机械性能及抵抗蛋白分解酶的降解能力,提高混合层的质量和稳定性,增强牙本质-树脂间粘接强度及粘接长效性。