【摘 要】
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目的: 确定CRC中miR-29a的靶基因，并研究miR-29a如何通过其靶基因参与CRC的远处转移。 研究方法: 我们前期研究已筛选出CRC中miR-29a可能作用的靶点，克隆其3UTR，构建靶
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目的: 确定CRC中miR-29a的靶基因，并研究miR-29a如何通过其靶基因参与CRC的远处转移。 研究方法: 我们前期研究已筛选出CRC中miR-29a可能作用的靶点，克隆其3UTR，构建靶基因3 UTR野生型报告基因质粒。然后将重组质粒中miR-29a的结合位点反向突变，构建靶基因3 UTR突变型报告基因质粒。运用荧光素酶实验分析miR-29a对靶基因调控作用。运用western blot技术在CRC细胞中验证miR-29a对靶基因的调控作用。运用免疫组织化学(IHC)技术检测靶基因在CRC组织及配对的非癌组织(NCT)中的表达，并运用qRT-PCR检测靶基因高低表达两组间miR-29a的表达，分析靶基因表达与miR-29a之间的相关性。最后运用transwell小室分析miR-29a所诱导的CRC细胞侵袭是否主要通过下调靶基因来实现的。 研究结果: 根据软件预测和查阅文献，筛选出KLF4可能为miR-29a靶基因。荧光素酶实验显示miR-29a mimics和ani-miR-29a分别显著下调或上调KLF43UTR野生型报告基因荧光素酶活性，但对KLF43UTR突变型报告基因荧光素酶活性无明显影响。Western blot结果进一步证实miR-29a反向调控KLF4蛋白表达。IHC结果显示与配对的NCT相比，KLF4蛋白在64％(54/85)的CRC肿瘤组织中表达下调，并且KLF4蛋白表达与miR-29a表达水平呈显著负相关。细胞侵袭试验证实KLF4过表达能够阻碍miR-29a所诱导的促进侵袭作用，而KLF4 siRNA能逆转anti-miR-29a所导致的侵袭下调。 研究结论: KLF4是miR-29a的靶基因，miR-29a可能是通过下调KLF4表达促进CRC远处转移。
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