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食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一。食管癌对人类的生命和健康具有极大威胁,但它目前防控前景仍不乐观。中国食管癌患者就诊时多处于中晚期,五年生存率一般在10%以下,但如果早期进行干预治疗,十年生存率可达95%。黑色素瘤抗原MAGE家族是肿瘤相关性抗原,它在许多恶性肿瘤组织中高表达,并与肿瘤的发生密切相关,而且部分家族已经作为药物靶点研究。其中,在前期研究的基础上发现MAGEA6与食管癌的发生密切相关。由于中国食管癌的发生与MAGEA6的关系及功能研究很少,本研究的目的是在前期研究的基础上,通过食管癌临床样本的进一步验证和食管癌细胞株的分析,再通过分子生物学和细胞生物学进行研究,明确其参与的信号通路,进而探索MAGEA6在食管癌发生中的功能。 本研究主要包括四部分,第一部分通过检测已有食管癌临床样本和食管癌细胞株中MAGEA6的表达情况,结果发现MAGEA6在食管癌样本组织中的阳性表达率为93.878%,在癌旁组织中不表达;MAGEA6在人永生化表皮细胞HaCat中几乎不表达,在食管癌细胞中表达。 第二部分通过质粒构建pcDNA3.1-MAGEA6载体转染到EC109和EC9706细胞中,然后进行相关基因的检测,结果显示MAGEA6上调,PCNA、P16、P53、MAGE-A3、Paxillin、Cyclin-D1、mk基因mRNA表达水平在EC109和EC9706细胞中均升高。 第三部分通过TALEN试剂盒基因敲除技术获得稳定EC109k8细胞,其MAGEA6敲除效率为82.4%。结果发现MAGEA6下调,PCNA、P16、P53、Paxillin、hsp70、bag-1基因mRNA表达水平在EC109k8细胞中降低。 第四部分通过进行细胞水平的检测,结果发现MAGEA6上调,细胞增殖趋势减弱,细胞迁移和侵袭能力也有减弱的趋势,细胞凋亡数有增强趋势,细胞周期中S期细胞数有下降的趋势,可能是S期受到阻滞;MAGEA6下调,细胞增殖趋明显增加,细胞迁移和侵袭能力也有明显增强的趋势,细胞凋亡数有减弱的趋势,细胞周期中G0/G1期细胞数明显增加,这可能预示着在为DNA的合成和细胞分裂做准备。 上述实验结果证明MAGEA6在食管癌中普遍性表达,它与食管癌的发生密切相关;MAGEA6基因的表达水平与PCNA、P16、P53、Paxillin基因表达水平呈正相关;MAGEA6基因上调和下调对细胞的影响可能提示MAGEA6在一定程度上发挥肿瘤抑制因子的作用。本次实验将更加深入的认识MAGE的功能,为了解MAGE类基因功能提供新的研究成果。同时,本课题将为食管癌的防治研究提供了基础和前期资料。