【摘 要】
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研究目的:(1)斑蝥酸处理胃癌细胞系合适的药物浓度,证明斑蝥酸具有诱导胃癌细胞凋亡的作用。(2)筛选出与斑蝥酸相关的lnc RNA,并检测其在胃癌中的表达水平及分析其与临床病理
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研究目的:(1)斑蝥酸处理胃癌细胞系合适的药物浓度,证明斑蝥酸具有诱导胃癌细胞凋亡的作用。(2)筛选出与斑蝥酸相关的lnc RNA,并检测其在胃癌中的表达水平及分析其与临床病理学之间的关系。(3)探讨该lnc RNA可能参与胃癌发生发展的相关信号通路。(4)探讨斑蝥酸抑制胃癌细胞发生侵袭、转移所参与的相关信号通路。研究方法:通过CCK8的实验方法摸索出斑蝥酸处理胃癌细胞适合的药物浓度。应用q RT-PCR的方法筛选出与斑蝥酸相关的lnc RNA CCAT1。通过q RT-PCR检测CCAT1在60对胃癌组织及其癌旁组织的表达水平,并分析其与临床病理特征之间的关系。使用KEGG数据库预测在人类肿瘤中与CCAT1相关的信号通路,并在此基础上应用q RT-PCR和western-blot实验方法检测预测信号通路中相关分子在胃癌组织和胃癌细胞系MGC803和BGC823在m RNA水平及蛋白水平的相对表达,进一步验证CCAT1与预测信号通路之间的关系。此外,继续检测胃癌细胞经斑蝥酸处理后该信号通路中关键分子在m RNA水平及蛋白水平的表达变化情况。最后通过划痕实验及Transwell实验验证斑蝥酸是否通过该条信号通路影响胃癌细胞的侵袭及转移。研究结果:1.通过CCK8实验,发现斑蝥酸对胃癌细胞系MGC803和BGC823的抑制呈剂量-时间依赖效应并摸索出斑蝥酸处理胃癌细胞最合适的浓度为5,10u M及作用时间为24h。2.在胃癌细胞系MGC803和BGC823中,使用q RT-PCR方法筛选与斑蝥酸相关的lnc RNA CCAT1。3.CCAT1在胃癌组织中的表达水平明显高于其在癌旁组织的表达水平,且CCAT1的高表达与CEA,肿瘤最大长径,神经脉管浸润,红细胞和血红蛋白明显相关。单因素分析提示高表达的CCAT1可作为肿瘤转移的危险因素。4.经KEGG数据库预测CCAT1与PI3K/Akt信号通路相关,该信号通路中关键信号分子在胃癌组织及胃癌细胞的表达水平(m RNA和蛋白)及胃癌组织在该信号通路关键分子的相关性分析提示CCAT1可能与该信号通路相关。5.胃癌细胞系MGC803和BGC823经斑蝥酸处理后,PI3k、p-PI3k、p-Akt的表达水平较未处理组降低,而PTEN的表达水平显著增高,提示斑蝥酸经过PI3K/Akt信号通路抑制胃癌细胞。6.经斑蝥酸处理后的胃癌细胞MGC803和BGC823,其MMP-9、MMP-2蛋白表达水平较对照组降低,而E-钙黏蛋白的表达水平较对照组增高,说明斑蝥酸抑制胃癌细胞的转移。7.划痕实验结果表明胃癌细胞经斑蝥酸加药处理后其划痕面积扩大具有时间-剂量依赖效应。Transwell实验结果表明,斑蝥酸抑制胃癌细胞的侵袭转移。研究结论:1.斑蝥酸诱导胃癌细胞凋亡且呈时间-剂量依赖性效应。2.在胃癌细胞系中,斑蝥酸调控CCAT1的表达从而影响胃癌的发生发展。3.CCAT1可作为预测胃癌侵袭转移的分子标记物。4.CCAT1可能参与PI3K/Akt信号通路从而调控胃癌的侵袭转移。5.斑蝥酸经PI3K/Akt信号通路抑制胃癌细胞的侵袭转移
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