脾阳虚证大鼠模型肝组织GSH-Px活性、端粒长度变化的实验研究

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目的:观察脾阳虚证大鼠模型肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和肝细胞端粒长度的变化,探讨中医脾阳虚证的分子生物学基础。方法:采用经典的复合因素造模法(劳倦过度+饮食失节+苦寒伤阳药)建立脾阳虚证大鼠模型:采用比色法检测肝组织GSH-Px活性,用Southern blot法测定肝细胞端粒长度。结果:与正常对照组相比,脾阳虚证大鼠模型组肝组织GSH-Px活性降低,肝细胞端粒长度缩短。结论:机体内GSH-Px活性降低、自由基蓄积损伤端粒,是脾阳虚证大鼠模型肝细胞端粒长度缩短的机制之一,提示端粒长度改变与脾阳虚之间有密切关系。中医学认为,人体是以五脏为中心的有机整体,五脏的生理功能在人体生命活动中起着重要的作用。脾为五脏之一,位居中焦,为阴中之至阴,五行属土,喜燥恶湿,与长夏之气相通。脾的主要生理功能为主运化、升清、统血,输布水谷精微,为人体后天之本,气血生化之源。端粒是位于真核生物线性染色体末端的一种特殊结构。端粒的功能是保持染色体结构的完整性,避免染色体丢失,防止核酸外切酶对DNA的降解、染色体末端的粘着、融合,同时参与染色体定位、复制。国内外大量实验研究表明,端粒的缩短是细胞衰亡的“生物钟”。自由基是机体内性质较活跃的强氧化剂,研究发现自由基及氧化应激反应都能损伤DNA结构,使端粒缩短而失去正常功能。近二十年来本学科对脾虚三证(脾气虚证、脾阳虚证、脾阴虚证)与自由基的氧化与抗氧化之间的关系,进行了系统的研究。结果表明,自由基损伤是导致脾虚发生的重要病理机制之一,故此我们有理由推测,脾阳虚证的发生可能与端粒损伤之间存在一定相关性。目前,关于脾阳虚证端粒长度变化的实验研究国内外尚无报道,因此,开展此项研究对于进一步探讨脾脏的分子生物学基础具有重要意义。本次实验将通过对脾阳虚证大鼠模型肝组织端粒长度和GSH-Px活性变化的研究,进一步揭示脾阳虚证的病理实质,为临床研究打下基础。本次实验的具体内容:(1)建立脾阳虚证大鼠动物模型。(2)观察脾阳虚证大鼠肝组织GSH-Px活性的变化。(3)观察脾阳虚证大鼠肝细胞端粒长度的变化。
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