真菌免疫调节蛋白LZ-8密码子优化表达及功能初步检测

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目的:原核优化表达并纯化LZ-8重组蛋白,对其免疫抑制活性做出检测评估。方法:利用生物信息学方法和工具对LZ-8蛋白和其所属的真菌免疫蛋白家族各成员进行分析和预测,以便对实验进行优化设计。设计并合成12个经过密码子优化的寡核苷酸片段,用重叠延伸PCR的方法将这些寡核苷酸片段连接成为新的LZ-8蛋白cDNA。将该cDNA连接进入pET-28b表达载体形成pET-28b_lz8重组质粒。以大肠杆菌BL21菌株为宿主,诱导表达重组蛋白,并用Ni离子亲和层析纯化重组蛋白。最后通过不同品系小鼠的皮肤移植模型检测重组蛋白的功能。结果:成功构建了能高效表达FIP-128重组蛋白的工程菌株。重组蛋白在宿主菌内表达,纯化后测定产量为70mg/L菌液。不同品系小鼠的皮肤移植模型检测评估表明:重组蛋白一定程度上提高了小鼠移植皮肤的存活率,具有一定的免疫抑制功能。结论:经密码子优化后,重组LZ-8蛋白能在大肠杆菌中具有很高的表达量,并具有一定的免疫调节功能。
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