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目的：建立方便、有效的HPV分型检测方法，扩大检测范围，提高HPV的检出率；初步探讨HPV不同亚型感染及多重感染与宫颈病变的相关性；预测HPV亚型的致病风险，确定高危人群，为宫颈癌筛查、个性化治疗、术后随访及HPV疫苗的应用提供帮助。
方法：
1.标本来源与分组：选取2005年9月～2007年3月于首都医科大学附属北京妇产医院就诊，宫颈细胞学检查示鳞状上皮异常或病理诊断为宫颈鳞癌的病例组患者411例，同期收集连续2年内宫颈细胞学检查无异常改变的对照组患者100例。
2.提取基因组DNA方法：将宫颈脱落细胞洗脱于1.5ml生理盐水中，常规柱式方法提取基因组DNA。
3.液态基因芯片分型检测方法：采用型特异性引物，多重PCR扩增HPVE6/E7基因片段，经多重分子杂交，液态基因芯片分型检测25种亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82、26、53、66、6、11、40、42、43、44、54)HPV感染。
4.经典PCR-凝胶电泳检测方法：通用引物MY09/11，单重PCR扩增HPV L1基因片段，经琼脂糖凝胶电泳定性检测HPV感染。
5.基因测序方法：分别抽取经液态基因芯片方法检测呈HPV阴性样本、单一亚型HPV感染样本、多重亚型HPV感染样本，经PCR扩增、产物浓缩、纯化后，采用自动测序法直接测序，测序结果与BLAST数据库中序列核对从而确定HPV基因型，测序结果与液态基因芯片、经典PCR-凝胶电泳检测结果进行比较。
6.统计学方法：应用SPSS11.5统计软件包，X2检验、logistic回归分析处理，P＜0.05为差异有统计学意义。
结果：
1.511例受试者中，液态基因芯片分型检测HPV总感染率为68.30％；病例组感染率(79.56％)明显高于正常对照组(22％)，有显著性统计学差异，P＜0.01；HPV感染率随宫颈病变程度的加重而增高，病例组中CIN组、宫颈鳞癌组的HPV感染率均高于宫颈慢性炎症组，有显著性统计学差异，P＜0.01。人群中高危亚型HPV感染率为64.38％，其感染率亦随宫颈病变程度的加重而增高。
2.25种HPV亚型中检出22种亚型感染，受试人群中感染率排在前十位的亚型为：16、58、52、18、33、59、51、53、31、6亚型。CIN组中前十位：16、58、52、18、33、31、53、59、6、51亚型。宫颈鳞癌组中前十位：16、52、18、58、33、51、59、31、39、45亚型。
3.HPV16亚型的人群检出率28.57％，为最常见的感染亚型。对照组中感染率为4％，远低于病例组(34.55％)，有显著性统计学差异，P＜0.01。病例组中16亚型感染率随宫颈病变程度的加重而增高，感染率从慢性炎症组的17.50％上升到宫颈鳞癌组的62.75％，宫颈鳞癌组的HPV-16亚型感染率明显高于慢性炎症组，有显著性统计学差异，P＜0.01。
4.HPV的多重感染率，对照组(4.55％)低于病例CIN组(33.2％)，差异有统计学意义，P＜0.05；随宫颈病变的加重，多重感染率逐渐上升，CINⅢ组的多重感染率最高，达38.81％；但宫颈鳞癌组多重感染率(23.66％)低于CIN组。
5.病例组313例均接受细胞学检查、HPV分型检测、病理学诊断的患者中，HPV分型检测对CIN及宫颈癌筛查的敏感度为84.5％、细胞学联合HPV分型检测为90.6％，均高于细胞学检查的敏感度(74.2％)，差异有统计学意义，P＜0.01。
6.病例组中101例细胞学检查为ASCUS的患者，HPV分型检测阳性率为67.33％，与病理诊断结果比较，HPV分型检测对CIN及宫颈癌检出的敏感度为81.67％，特异度为53.66％。
7.Logistic回归分析：与对照组相比，宫颈癌组中HPV-16、18、52、58亚型感染优势比分别为79.39、14.98、11.73、4.64，P＜0.05；CIN组中HPV-16、18、52、58、59亚型感染的优势比分别为14.92、7.88、15.79、6.69、6.17，P＜0.05：HPV-16、18、52、58、59亚型感染与宫颈癌/CIN的发生高度相关。
8.经典PCR-琼脂糖凝胶电泳检测：511例样本中检出HPV阳性251例，检出率为49.12％，251例阳性样本均被液态基因芯片方法检出。液态基因芯片方法对CIN及宫颈癌检出的敏感度为86.4％，明显高于经典PCR-电泳检测方法(65.0％)，差异有统计学意义，P＜0.01。
9.基因测序结果显示，6例液态基因芯片检测为单一HPV亚型感染者，测序结果与液态基因芯片检测结果一致；2例液态基因芯片检测阴性的样本，显示无PCR扩增产物；2例多重亚型HPV感染样本，测出的序列进行BLAST序列比对，显示无法确定基因型。
结论：
1.液态基因芯片方法快捷、有效的进行HPV分型检测，众多亚型检测一次完成，同时检测多重HPV感染，具有较高的敏感性和准确性，建议此方法临床推广应用。
2.本研究提示，高危型HPV感染与宫颈癌及癌前病变的发生高度相关；我国北方汉族宫颈病变患者中最常见的HPV感染高危亚型为16、58、52、18、33亚型；HPV亚型的多重感染可能在宫颈癌的发生发展过程中发挥重要作用。
3.本研究提示，HPV分型检测对宫颈病变患者和高危人群具有较好的检出效果，建议临床采用细胞学检查联合HPV分型检测筛查宫颈病变。