安徽地区猪传染性胸膜肺炎血清学调查及APP分离与生物学特性研究

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猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP),是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种猪高度传染性呼吸道疾病,严重危害我国养猪业的健康发展。为了解安徽地区PCP的流行情况,提高APP亚临床感染的检出率和细菌分离率,并研究分离株的生物型特性,本试验将从以下几个方面开展。  运用ApxIV-ELISA试剂盒检测1288份血清感染抗体,了解安徽地区总体感染情况及流行特点。结果显示,APP感染抗体总阳性率为26.40%(340/1288),猪场感染率为78.37%(58/74),母猪/后备母猪/公猪 APP感染抗体阳性率(45.47%)高于哺乳仔猪(28.02%)、保育猪(6.16%)、育肥猪(7.20%);夏季(41.42%)高于春季(29.75%)、秋季(26.35%)、冬季(19.26%),淮北地区(30.73%)和江淮地区(28.57%)高于皖南地区(13.77%),中型猪场(47.16%)高于大型猪场(19.28%)和小型猪场及散养户(23.15%)。安徽地区 PCP的流行特点,为制定有效防控措施提供了科学依据。  比较dsbE-PCR、omlA-PCR和ApxIVA-PCR的敏感性和特异性,并同时运用三种PCR方法检测135份母猪鼻腔棉拭子中APP核酸,比较三种PCR方法的APP核酸检出率。结果显示:三种PCR最低检测限度均为102CFU,且至对APP发生反应;dsbE-PCR方法的APP核酸检出率(23.7%)显著高于omlA-PCR(8.1%)和ApxIVA-PCR(14.8%),三者符合率较高,分别为84.4%、91.1%和93.3%。本试验为APP亚临床感染分子检测方法的改良提供参考。  同时使用添加抗生素、NAD及血清的mPPLO、TSA、CA和BA四种选择性培养基分离135份母猪鼻腔棉拭子中APP,比较四种分离培养基的分离率。结果显示:mPPLO的APP分离率(11.9%)显著高于TSA(0.7%)、CA(5.2%)和BA(2.2%),四者符合率较高,分别为88.9%、93.3%、90.37%、95.6%、98.5%和97.0%。本试验为猪鼻腔中APP分离方法的优化及培养基的选择提供理论参考。  通过细菌学试验,研究APP分离株和参考株的生化特性。结果显示:分离株和参考菌株的细菌形态、生化特性以及生长曲线一致。G-,具有典型的多形性,菌体较小,多为球杆菌;与甘露醇、葡萄糖等反应为阳性,与乳糖、七叶苷等反应为阴性;2h~12h期间处于对数期,12h~14h达到最大值,14h后稍有下降并趋于平稳。本试验结果为APP的细菌学检测、生化鉴定及疫苗制作提供参考依据。  运用常规药敏纸片法,研究APP分离株药物敏感性。结果显示:安徽分离株对环丙沙星,氟苯尼考和诺氟沙星的敏感率最高(100%),其次是阿奇霉素和复方新诺明(85.7%),对丁胺卡那、青霉素等较敏感(71.4%~42.9%),对四环素、阿莫西林、万古霉素和林可霉素耐药(0%);福建分离株对环丙沙星和氨苄西林的敏感率最高(88.9%);其次是诺氟沙星、卡那霉素和头孢唑林(77.8%),对青霉素、氟苯尼考等较敏感(66.7%~33.3%),对四环素、林可霉素和万古霉素耐药(0%)。本试验为APP临床用药提供指导。  通过辅酶试验,鉴定APP的生物型。结果显示:安徽分离株及参考菌株属于生物I型,福建分离株属于生物II型;运用ApaI-PFGE技术,对APP分离株及参考株进行基因型分型。结果显示:参考株和分离株共分为6种基因型,不同地区、相同地区不同猪场、相同猪场APP分离株间基因型均有差异,本试验为今后安徽地区APP筛选流行优势菌株及疫苗免疫菌株的选择垫定了基础。
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