骨性关节炎患者外周血白细胞中糖相关基因表达分析

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yp445163091
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目的:总结骨性关节炎中医现状及基因组学研究进展,利用糖相关基因芯片技术比较骨性关节炎组与正常对照组之间外周血白细胞中糖基因转录水平的变化,研究骨性关节炎对外周血白细胞蛋白糖基化的影响,寻找与骨性关节炎相关的变化,探讨骨性关节炎的分子机制,为骨性关节炎的检测及治疗提供帮助。  方法:选取15位骨性关节炎患者及15位健康志愿者,静脉采血的方式抽取2.5ml外周血,制成外周血样本保存,并将其分为骨性关节炎组和正常对照组。提取样本RNA,经定量后,检测其完整性,荧光标记后与糖相关基因芯片杂交清洗。最后进行芯片扫描及数据的读取与分析,筛选差异表达基因,进行实时荧光定量PCR验证分析。  结果:提取的外周血白细胞RNA28S,及18S条带完整,无明显降解;38个差异表达基因中,骨性关节炎组上调表达的基因有18个,下调表达的基因有20个;基因芯片层聚类分析显示,骨性关节炎组与正常对照组糖相关基因表达分布存在差异;RT-PCR结果显示,糖相关基因芯片筛选出的6个差异表达基因在10个骨性关节炎患者中表现出相同的差异表达趋势;聚糖合成代谢通路分析显示参与N-聚糖前体合成的DPM3和ALG8转录水平发生上调,GLB1和MAN2B1表达上调,O-聚糖合成方面,参与O聚糖Tn抗原(GalNAcα-Thr/Ser)合成的糖基转移酶GALNT19和core2和core4结构合成的糖基转移酶GCNT3表达同时上调,因此我们推测,O-聚糖core2和core4结构在骨性关节炎患者外周血白细胞中表达增加。  结论:芯片数据经归一化处理及分析,共筛选出38个差异表达基因,其中18个在骨性关节炎组中表达上调,20个在正常对照组中表达水平较高。应用实时定量RT-PCR对6个差异表达基因进行验证,结果与芯片结果一致。通过对差异表达基因进行通路分析,骨关节炎外周血白细胞,硫酸化作用增高,糖链Galβ1-4GlcNAc降解作用增强,O-聚糖合成core2和core4结构增多,而这些变化可能与骨性关节炎造成的滑膜炎性物质释放引起的免疫应答有关,从而导致关节软骨的降解。
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