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目的:通过观察陈皮碱性提取物对体外经TGF-β1诱导A549细胞的上皮间质转化的抑制作用;以及其对体外EMT模型细胞E-cad、α-SMA、Vimentin蛋白和mRNA水平的影响,探讨陈皮碱性提取物干预肺间质纤维化新的分子机制,为中医药治疗肺间质纤维化提供新思路。方法:通过镜下观察A549细胞形态,筛选最佳的细胞种植密度、TGF-βl作用浓度、TGF-β1的作用时间;通过CCK8法筛选陈皮碱性提取物作用浓度;将处于指数生长期的正常A549细胞分为6组:空白组、模型组(TGF-β1)、高剂量组(TGF-β1+陈皮碱性提取物750μg/ml)、中剂量组(TGF-β1+陈皮碱性提取物500μg/ml)、低剂量组(TGF-β1+陈皮碱性提取物250μg/ml)、吡非尼酮组(TGF-β1+吡非尼酮0.2μg/ml)。无血清饥饿过夜后,模型组加入终浓度5ng/ml的TGF-β1溶液,各给药组在此基础上再加入不同浓度的陈皮碱性提取物,吡非尼酮组加入吡非尼酮溶液,作用24h;用Western blot检测各组E-cad、α-SMA、Vimentin 蛋白表达水平;用 RT-PCR 法检测各组 E-cad、α-SMA、Vimentin mRNA表达水平。结果:通过镜下观察,选定细胞种植密度为3000个/孔、TGF-β1作用时间为24h,作用浓度为5ng/ml。TGF-β1作用下的A549细胞由多边形向长梭形转化,细胞之间的间隙增大,连接不再紧密。经CCK8法检测后,陈皮碱性提取物对体外EMT模型的抑制率与浓度呈正相关,其中浓度为750μg/ml时,抑制率为60.18%,选定750μg/ml为高剂量组、50(μg/ml为中剂量组、250μg/ml为低剂量组。经LDH法检测后,各浓度的陈皮碱性提取物作用下,各组LDH释放量与空白组无统计学差异。Western blot检测提示,与空白组相比,各组细胞E-cad的蛋白表达下调,有统计学差异(p<0.01);高、中剂量组E-cad表达水平与模型组相比,明显上调(p<0.01);较空白组相比,其余各组除高剂量组的α-SMA蛋白表达上调明显(p<0.01);较模型组相比,各组的a-SMA蛋白表达下调,具有统计学意义(p<0.01);模型组及各给药组,与空白组相比,Vimentin蛋白表达上调(p<0.01);各组Vimentin蛋白表达较模型组明显下调(p<0.01)。RT-PCR检测显示,与空白组相比,各组E-cad mRNA表达量下调明显(p<0.05);除低剂量组外,各给药组E-cad mRNA与模型组相比均有上调,且差异明显(p<0.05);就α-SMAmRNA表达量而言,各组较空白组表达上调明显(p<0.05),模型组表达量最高;与模型组相比,各给药组表达均呈明显下调(p<0.05),而高剂量组与吡非尼酮组α-SMA mRNA差异不明显(p>0.05),中剂量组、低剂量组与吡非尼酮组相比显著上调(p<0.05);与空白组相比,其余各组VimentinmRNA表达量较其余各组上调明显(p<0.05);较模型组相比,其余各组Vimentin mRNA表达明显下调(p<0.05)。结论:①TGF-β1可诱导A549细胞上皮间质转化;②陈皮碱性提取物对EMT体外模型进行干预;③陈皮碱性提取物下调EMT体外模型中α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达,上调E-cad蛋白及mRNA表达水平;抑制A549细胞EMT进程。④吡非尼酮不能上调EMT体外模型中E-cad蛋白表达水平。