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研究目的:复方丹参滴丸是天士力集团采用最新的工艺独家研制生产的现代中药,在冠心病、心绞痛等心血管疾病的临床预防、治疗和急救方面有着非常良好的效果,上市十几年来已成为治疗心脑血管疾病的重要药物,也是天士力集团第一主打产品。复方丹参滴丸由丹参、三七和冰片组成,现代研究表明,冰片具有促进其他药物吸收的作用。目前,对复方丹参滴丸有效性及配比的合理性研究多从药效学及临床研究入手,相关药动学研究较为薄弱。因此,本文开展相关实验考察不同配比的冰片对复方丹参滴丸组方中的主要成分吸收的影响趋势,考察冰片在该制剂中配比的合理性。本论文以含不同配比冰片的复方丹参制剂为研究对象,通过体内药动学实验及体外肠外翻实验研究冰片对复方丹参制剂中丹参和三七主要成分吸收的影响情况,考察冰片在复方丹参制剂中配伍比例的合理性,为临床及药效学研究结果提供有力支持,为产品的深入研究及二次开发奠定基础。研究方法:(1)本课题中5种含不同冰片配比的复方丹参制剂,由等量复方丹参提取物(与复方丹参滴丸成分相同,但不含冰片)与不同量的冰片配伍,经制备工艺制备而成。分别为无冰片复方丹参制剂,以及复方丹参提取物与冰片配比量之比分别为10:0.5,10:0.75,10:1,10:1.5的共五种制剂,其中10:1组制剂与复方丹参滴丸配比相同。实验中将无冰片,10:0.5,10:0.75,10:1,10:1.5这5种制剂给药组依次命名为无冰片组,10:0.5组,10:0.75组,10:1组,10:1.5组。(2)针对选取的丹参、三七指标性成分分别建立LC-MS/MS测定方法,并对两种方法的线性、精密度、准确度、回收率、稳定性等方面进行了考察,应用于体内药动学及体外肠外翻实验研究中样品定量分析。(3)单次灌胃给药后24h内大鼠血样,经预处理后进行丹参指标性成分LC-MS/MS分析;取灌胃给药后72h内大鼠血样,经预处理后进行三七指标性成分LC-MS/MS分析。将血药浓度-时间数据采用DAS 2.0药代动力学软件按非房室模型处理,计算大鼠体内不同主要成分的主要药代动力学参数,并进行统计分析,考察冰片对丹参、三七指标性成分大鼠体内吸收的影响。(4)选择大鼠肠囊外翻模型考察冰片对复方丹参制剂中主要成分肠吸收影响的研究,分时间点取样后LC-MS/MS分析,对吸收速率常数Ka进行统计分析。研究结果:(1)本实验建立了2种LC-MS/MS方法分别对大鼠血浆中丹参、三七指标性成分进行定量分析,同时也应用于肠外翻实验中样品测定。经验证方法符合方法学要求。(2)丹参部分药动学研究结果表明不同剂量冰片对复方丹参制剂中丹参指标性成分大鼠体内吸收无显著影响,如5组中丹参素 AUC0-24h(ng.h/mL)分别为 844.57±567.41,780.38±596.50,1285.07±741.42,1172.18±453.39,1128.54±695.32;4-羟基-3-甲氧基苯基乳酸AUC0-24h(ng·h/mL)分别为 888.1 8±229.19,705.20±338.97,1043.10±466.02,1072.57±31 0.34,1085.75±523.05;原儿茶醛 AUC0-24h(ng·h/mL)分别为89.69±37.64,94.03±49.77,78.56±42.42,96.82±45.9 1,78.46±43.07;原儿茶酸AUC0-24h(ng·h/mL)分别为 367.13±126.94,417.72±108.98,629.29±133.48,489.39±144.43,477.07±238.51。冰片能促进人参皂苷 Rg1 和 Rb1大鼠体内的吸收,加快吸收速度,其中无冰片组,10:0.5组,10:0.75组,10:1 组,10:1.5 组中 Rg1 的 AUC0-72h(ng·h/mL)分别为 8.80±4.87,8.58±3.47,8.32±2.41,15.27±4.80,14.48±3.98,Tmax分别为0.89±0.66,0.26±0.11,0.28±0.08,0.25±0,0.22±0.06;Rb1的AUC0-72h(ng·h/mL)分别为2126.70±1 173.1 1,2092.69±1275.41,1636.59±736.40,3475.55±1501.17,3890.31±2095.39,Tmax分别为4.81±2.32,3.75±2.53 3.62±2.04,1.90±2.64,1.37±1.72。(4)肠外翻实验中丹参素、原儿茶醛、人参皂苷Rg1和Rb1累计吸收量-时间曲线回归方程的R2均大于0.9,符合零级吸收。无冰片组和有冰片组中丹参素在回肠、空肠、十二指肠的吸收速率常数(Ka)分别为0.0217±0.0048 和 0.0121±0.0020,0.0221±0.0017 和 0.0172±0.0036,0.0352±0.002和0.0186±0.002;原儿茶醛在回肠、空肠、十二指肠的吸收速率常数分别为 0.0052±0.0005 和 0.0055±0.0009,0.0083±0.0005 和0.0084±0.0022,0.0079±0.0005 和 0.0070±0.0005;人参皂苷 Rg1 在回肠、空肠、十二指肠的吸收速率常数分别为0.0089±0.0019和0.0118±0.0019,0.0064±0.00 和 0.0105±0.0027,0.0198±0.0018 和 0.0151±0.0021;人参皂苷Rb1在回肠、空肠、十二指肠的吸收速率常数分别为0.0017±0.0004和0.0020±0.0003,0.0010±0.00 和 0.0022±0.0005,0.0043±0.0003 和0.0026±0.0005。结果显示,冰片对原儿茶醛肠吸收无显著影响,对丹参素,人参皂苷Rg1和Rb1不同肠段吸收影响趋势不一致。研究结论:(1)本实验针对丹参、三七指标性成分分别建立液质联用测定方法,方法准确,简便快速。经方法学验证,两种方法适用于复方丹参制剂大鼠体内药动学及肠吸收实验研究中样品的定量分析。(2)针对丹参类四种指标性成分药代动力学参数进行分析,五个给药组随着冰片配比量的增加药动学参数AUC0-24h、AUC0-∞、Tmax、Cmax等均无显著性差异,提示在复方丹参滴丸中,冰片对丹参主要成分无促吸收作用。(3)针对三七两种指标性成分药代动力学参数进行分析,与无冰片组进行比较,1 0:1组的AUC0-72h、Cmax显著增大,Tmax显著减小,提示10:1组中冰片提高了皂苷类成分的体内暴露量并加快了皂苷类的吸收速度。10:1组与1 0:1.5组的药代参数比较均无显著性差异,说明当冰片配伍比例超过复方丹参滴丸中冰片配比量时,对皂苷类成分没有更进一步促吸收作用。以上结果说明复方丹参滴丸中冰片对三七指标性成分具有促吸收作用,且配比合理。(4)针对肠外翻数据进行分析,冰片对原儿茶醛在小肠的吸收无影响,在回肠和十二指肠中对丹参素吸收略有抑制。冰片对Rg1、Rb1在回肠的吸收无影响,在空肠促进Rg1、Rb1吸收,在十二指肠抑制Rg1、Rb1吸收。由于两个给药组中Rg1和Rb1在不同肠段吸收的影响趋势不一致,判断冰片对人参皂苷Rg1、Rb1体内吸收的影响可能不是通过影响其肠吸收实现的,是否通过其他途径应进一步深入研究。