茵连痛风方有效部位群的质量控制与药效作用研究

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痛风(gout)是由于嘌呤代谢紊乱,尿酸(uricacid,UA)产生过多或排泄减少所引起的一组尿酸以钠盐的形式沉积在软骨、软组织、肾脏及关节中导致组织产生异物炎性反应的疾病。目前,单纯的西医治疗效果欠佳,而采用中医药和中西医结合的治疗方法具有较好的疗效,并有良好的发展前景和市场需求。   本课题的研究对象茵连痛风方,是岳阳中西医结合医院名老中医夏涵教授临床使用多年,具有显著疗效的经验方。茵连痛风方由茵陈、连钱草、伸筋草三味药物配伍而成,具有清热利湿,通络的功效,临床用于治疗痛风性关节炎等症。   本课题采用现代科学方法和实验技术手段,对茵连痛风方进行有效部位群的提取,建立各个部位群含量测定方法,并通过体内药效学和体外酶学实验确定该复方的主要药效物质基础和可能的作用机制。   1.建立各部位群的含量测定方法:采用紫外分光光度法(ultraviolet spectrophotometry,UV),建立总黄酮和总生物碱的含量测定方法,并测定不同提取批次中总黄酮和总生物碱的含量;采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),建立绿原酸的含量测定方法,并测定不同批次中绿原酸的含量;建立的含量测定方法的重复性、精密度、稳定性良好,可以从化学角度较全面完整地反映各提取部位群的化学成分的组成比例状况。   2.体内药效学研究:采用尿酸钠(monosodiumurate,MSU)致SD大鼠踝关节、足跖肿胀模型,测定踝关节、足跖肿胀率,患肢压力积分及步态积分以观察茵连痛风方和各提取部位群的抗痛风性关节炎的作用;采用腺嘌呤合乙胺丁醇诱导SD大鼠高尿酸血症模型,测定大鼠血尿酸和尿尿酸水平以观察茵连痛风方和各提取部位群的降尿酸作用;检测血清黄嘌呤氧化酶和肝脏黄嘌呤氧化酶活性,以观察茵连痛风方和各提取部位群的降尿酸的可能作用机制;同时测定模型大鼠血肌酐、尿素氮、肾脏重量系数,以观察茵连痛风方和各提取部位群对高尿酸血症大鼠肾脏损害的影响。结果表明茵连痛风方及A有效部位群(总黄酮∶总生物碱∶总有机酸=25∶2∶10)有明显的抗痛风作用,说明A有效部位群是该方起作用的主要药效物质基础。通过黄嘌呤氧化酶活性和尿尿酸的测定结果,结果证实茵连痛风方及其A有效部位群可能是通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性和促进尿酸的排泄来达到抗痛风效果。   3.体外酶学验证:测定5种不同浓度的黄嘌呤在15分钟的吸光度值,通过线性回归得到酶促反应方程:Y=178.35X-390.28。通过测定不同浓度槲皮素对照品对黄嘌呤氧化酶的抑制作用,得到不同浓度槲皮素的抑制率及IC50值,IC50=2.48μg·ml-1。通过测定不同浓度A有效部位群对黄嘌呤氧化酶的抑制作用,得到不同浓度A有效部位群的抑制率及IC50值,IC50=30.03μg·ml-1。体内研究结合体外进一步证实了茵连痛风方有效部位群对黄嘌呤氧化酶活性具有一定的抑制作用。   上述研究结果,为临床合理应用茵连痛风方提供了科学依据,也为其进一步深入研究及新药创制奠定了良好的基础。
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