【摘 要】
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目的：克隆组织纤溶酶原激活物(t-PA)基因并构建一种无细胞毒性、不激活原癌基因的真核表达的pcDNA3.1(+)/t-PA质粒载体。 方法：采用高效Trizol试剂快速从胎儿肺组织中提取RN
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目的：克隆组织纤溶酶原激活物(t-PA)基因并构建一种无细胞毒性、不激活原癌基因的真核表达的pcDNA3.1(+)/t-PA质粒载体。 方法：采用高效Trizol试剂快速从胎儿肺组织中提取RNA，RT-PCR获得t-PA cDNA，扩增、纯化、回收t-PA基因片段并将质粒pcDNA3.1(+)和t-PA基因片段分别双酶切，前者纯化回收大片段，后者纯化回收1.9kb片段，再将回收的pcDNA3.1(+)大片段与t-PA基因片段(1.9kb)重组。对重组pcDNA3.1(+)/t-PA质粒进行单酶切和双酶切鉴定，并测序。 结果：成功地从胎儿肺组织中克隆了t-PA基因，并构建了以pcDNA3.1(+)为载体的真核表达质粒载体。重组的pcDNA3.1(+)/t-PA经HindⅢ单酶切后出现了一个6.9kb片段、经HindⅢ和BamHI双酶切后出现了5.0kb和1.9kb两个片段，测序结果证明为人全长t-PAcDNA。 结论：含t-PA基因新型表达质粒构建的成功将为基因防治血管重建术中局部血栓形成奠定基础。
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