IL-33诱导自噬缓解小鼠实验性肠炎的研究

• 作 者: 石丽峰
• 机 构: 华中科技大学
• 出 处: 华中科技大学
• 发表日期: 2015年期
• 关键词: 炎症性肠病 巨噬细胞 蛋白表达 细胞病理学

背景：IL-33作为IL-1家族的新成员，广泛表达于全身各组织，尤其在胃肠道组织中。本课题组之前报道，在TNBS诱导的小鼠肠炎模型中，IL-33在结肠组织中增多，并起缓解的作用。自噬是存在于真核细胞中的一种现象，通过自噬小体与溶酶体的结合，降解细胞中受损的蛋白与细胞器，产生氨基酸等小分子供细胞重复利用。有文献报道，自噬相关基因的缺失与肠炎的易感性相关。有文献报道 IL-1家族成员IL-1α和IL-1β能诱导巨噬细胞产生自噬。因此IL-33可能通过诱导自噬来缓解肠炎。　　目的：探究IL-33如何通过自噬来缓解肠炎。　　方法：⑴小鼠肠炎模型的制备：第0天经直肠缓慢注射TNBS溶液，每天记录小鼠体重，第4天时，处死小鼠，收集样本。⑵成功制备TNBS诱导的小鼠肠炎模型后，通过用western blot方法检测肠炎组与对照组小鼠结肠组织自噬相关蛋白LC3II与LC3I比值的变化。⑶诱导肠炎后，术后0天起雷帕霉素灌胃（2mg/kg），3-MA腹腔注射（24mg/kg），IL-33腹腔注射（2μg/day），PBS腹腔注射（与IL-33同体积）。观察小鼠体重的变化，测量小鼠结肠长度，HE染色检测炎症细胞浸润和肠壁结构变化，western blot检测肠道组织自噬相关蛋白LC3II与LC3I比值的变化。⑷提取小鼠骨髓来源的巨噬细胞进行体外培养，第7天时，给予IL-33刺激24h，氯喹刺激10h。收集细胞提取蛋白检测自噬相关蛋白LC3II与LC3I比值的变化和P62的变化。　　结果：①成功建立TNBS诱导的小鼠肠炎模型。②与对照组比，肠炎组小鼠结肠组织中自噬蛋白LC3II与LC3I比值增高。③自噬激活剂雷帕霉素可以缓解肠炎，而自噬抑制剂3-MA却加重肠炎。④给IL-33能缓解肠炎并增加自噬蛋白LC3II与LC3I比值的表达。⑤在体外，IL-33可以诱导巨噬细胞自噬蛋白LC3II与LC3I比值增多，给予氯喹后进一步证明IL-33可以诱导自噬。　　结论：⑴在TNBS诱导的小鼠肠炎中结肠组织中自噬是增加的，并起保护性作用。⑵在TNBS诱导的小鼠肠炎中IL-33可以诱导自噬来缓解肠炎。