CFDA-SE标记的兔虹膜色素上皮细胞移植的研究

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目的:观察经羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记的兔虹膜色素上皮细胞(IPECs)移植后的生长及表达情况。 方法:将20只青紫兰兔平均分成4组,(A、B、C、D)应用酶消化机械分离方法培养兔IPECs,用CFDA-SE对传1~2代的IPECs进行染色后移植于视网膜下腔,采用直接检眼镜、眼底荧光血管造影(FFA)、光学相干断层扫描(OCT)等方法动态观察。移植后15天(A组)、2个月(B组)、4个月(C组)及6个月(D组)时分别处死动物,采用光镜和荧光显微镜观察移植的IPECs形态和免疫荧光情况。 结果:1、FFA检查显示,A-C组荧光呈点片状,范围逐渐扩大,3-4个月时荧光强度达到最大; D组荧光范围进一步扩展,但强度有所减弱。2、OCT:A组可见RPE层之上团块状的高反射;B、C组细胞团块逐渐铺开,RPE层显示为局部较正常略增厚的高反射条带;D组的RPE层则显示为完整的正常反射条带。3、石蜡切片:A组植入的IPECs在视网膜下腔呈团块状聚集,未见明显炎症反应;B.D组可见IPECs与原位RPECs逐渐融合成单层。4、荧光显微镜观察:A组可见成团的、明亮的黄绿色荧光位于RPE层之上,ZO-1蛋白表达呈阴性;B、C组多表现为单个的黄绿色荧光,分散在RPE层之上或与之融合,ZO-1蛋白可见局部不规则分布;D组IPECs荧光呈线状并嵌插在原始RPECs之间,ZO-1蛋白表达短线状的红色荧光。 结论:1、经CFDA.SE标记的IPECs移植到视网膜下腔后,荧光可持续追踪至术后6个月;2、移植的IPECs与原位RPECs之间ZO-1蛋白呈阳性表达,推测其可代替RPECs形成血一视网膜外屏障。
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