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疫苗对于一些疾病,比如天花、麻疹、水痘和脊髓灰质炎特别有效。它们是疾病预防最安全和经济有效的药物之一。近年来,疫苗也用作治疗爱滋病和癌症等其他疾病。癌症疫苗可分为预防性或治疗性的。预防性疫苗,例如市售的宫颈癌和肝癌疫苗,它们分别是由于感染人类乳头状瘤病毒和乙型肝炎病毒而致病的,预防性疫苗对它们的预防是有效的。癌症疫苗治疗的目的在于针对癌细胞“刺激”免疫系统,目前这种效果比较低。在癌症中用疫苗治疗相对较新,主要处于实验阶段。乳腺癌、肺癌、结肠癌、皮肤癌、肾癌、前列腺癌和其它癌症的治疗性疫苗相关性研究仍然处于临床试验阶段当中。 目的:此次研究的主要目的是鉴定高表达于肿瘤细胞中的抗原MUC4的HLA-A3限制性CTL表位。 方法:首先,通过预测工具NetCTL1.2、BIMAS、SYFPEITHI和IEDB对MUC4的HLA-A3表位进行表位预测。所筛选出来的表位肽的合成方法使用标准的Fmoc的方法进行合成,通过使用高效液相色谱进行纯化后,再使用质谱进行分析鉴定,所得到的结果用来证实分子量是否符合理论值。通过使用T2A3细胞的结合力检测候选肽与MHC分子的结和力,RT-PCR和Western blot分析肿瘤细胞中MUC4的表达, ELISPOT和LDH实验等检测表位肽诱导CTL的能力。 结果: 1.综合以上表位预测结果的软件,此次实验初步筛选了八个天然表位肽:P260(NTSMMTSEK)、 P320(TQDTTAFSK)、 P397(KVFRMPISR)、 P532(GTIPRVPSK)、 P1008(TVSSDSPLK)、 P1193(KITNNGGYK)、 P1300(GLQFYGLHR)、P1365(QLCSFTSWR)。之后进行Fmoc固相合成,使用质谱分析鉴定表位肽理论分子量。 2.候选表位P260、P397、P532、P1008、P1365结合力较高。 3.候选表位的体外实验:①ELISPOT结果显示P260、P397、P532、P1008、P1365表位肽都能分泌较多的IFN-γ。②体外细胞毒活性实验中,CTL体外杀伤结果显示:P260、P532、P1008对肿瘤细胞T-47D(MUC4+,HLA-A3+)产生杀伤作用。 结论: 1.天然表位肽P260、P397、P532、P1008、P1365显示出了较强的结合力。 2.用HLA-A3+健康供者外周血单核细胞,结果显示P260、P397、P532、P1008、P1365表位肽都能分泌较多的IFN-γ; 3.LDH细胞毒性实验显示P260、P532、P1008诱导的CTL具有能够有效杀伤T-47D(HLA-A3+,MUC4+)肿瘤细胞的能力。 4.P260、P532、P1008可能是MUC4抗原的HLA-A3限制性CTL候选表位。