【摘 要】
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为了研制一种简单、快速、具有高灵敏度和特异性的国产HIV诊断试剂,以满足新一 代HIV酶联免疫分析法即更敏感的双抗原夹心法对HIV多种抗原的需求,该文利用DNA重组技 术来获得
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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为了研制一种简单、快速、具有高灵敏度和特异性的国产HIV诊断试剂,以满足新一 代HIV酶联免疫分析法即更敏感的双抗原夹心法对HIV多种抗原的需求,该文利用DNA重组技 术来获得HIV的重组抗原p24,gp41和gp36.主要研究内容及结果如下:(1)利用PCR技术从国际标准株HXB2中扩增Gag开放阅读框架的内壳蛋白p24基因,将经酶切、PCR和测序得到验证 的目的基因插入到三种原核表达载体pTXB1,pET22b和pExSecI中,通过IPTG诱导得到C端融 Intein-CBD,6×His以及非融合的p24蛋白,其表达量分别占全菌体的12i,17i和38i.大量发酵后的工程菌经亲和层析(pTXB-p24和pET-p24)或包涵体纯化(pExSecI-p24)得到非融合和融合6×His的三种p24蛋白.(2)采用PCR的方法对HIV-1 gp41 N-末端部分包含抗原决定簇的基因进行分段扩增,得用pGEX-5x表达载体在大肠杆菌中高效表达了两段gp41基因.(3)采用PCR的方法对HIV-2 ROD株和ST株的gp36 N-末端部分基因进行扩增,利用原核表达载体pGEX-36(ROD株)和pGEX-36(ST株),并在大肠杆菌中获得表达.(4)构建了HIV-2 ST株gp36基因的 杆状病毒表达载体,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,得到了HIV-2株gp36基因的重组杆 病毒,用该重组杆状病毒感染昆虫细胞表达HIV-2的gp36,并对该蛋白的抗原性作出评价. 总之,他们成功地构建并表达了HIV-1 p24,gp41和HIV-2 gp36的蛋白,并对其进行了纯化 ,获得了大量高纯度p24,gp41和gp36蛋白除了可以组建HIV-1/HIV-2诊断试剂盒外,对其晶体学和功能研究,专一抗体制备以及预后应用都有很大的意义.
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