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目的：在本实验研究就中，我们将研究狼毒素与人Hep-2喉癌细胞生长之间的关系，并探究它们之间可能的作用机制。 方法：1、MTT法检测不同浓度的狼毒素作用不同时间对Hep-2的增殖的影响，以及不同浓度的狼毒素和芹菜素对Hep-2，NCI-H1975，HT-29，SKOV-3，HEK293胞株增殖的抑制效应。2、Western Blot法检测经(0，1，2，4μ M)狼毒素作用后的Hep-2细胞的裂解产物中的p-Ser473-Akt，Akt，p-BAD，BAD，p-GSK-3β和GSK-3β的蛋白表达，并作定量分析。3、Western Blot法检测经(0，1，2，4μ M)狼毒素作用后的Hep-2细胞的裂解产物中1型胰岛素样生长因子受体α(IGF-1Rα)和磷酸化-1型胰岛素样生长因子受体Tyr1131/胰岛素受体Tyr1146[P-1R(Tyr1131)/(Tyr1146)]的蛋白表达，并作定量分析。4、Western Blot法检测经(0，1，2，4μ M)狼毒素作用后的Hep-2细胞的裂解产物中的pro-caspase9，cleaved-caspase9，pro-aspase3和cleaved-caspase3的蛋白表达，并作定量分析。5、构建裸鼠模型，按10和30mg/kg.d狼毒素的剂量灌饲荷Hep-2细胞的裸鼠，观察裸鼠体重及移植瘤体变化。6、ELISA法检测狼毒素作用后的移植瘤中M-30的反应检测细胞凋亡。7、Western Blot法检测在喂饲相应剂量的狼毒素后的肿瘤裂解物中的Akt，p-Ser473-Akt，GSK-3β，p-GSK-3β，BAD，p-BAD-Ser136，pro和cleaved-caspase9，pro和cleaved-caspase3的蛋白表达，并作定量分析。 结果：1、狼毒素抑制Hep-2细胞生长，总体表现为剂量-时间依赖性。狼毒素作用于Hep-2，PC-3，NCI-H1975，HT-29和SKOV-3较芹菜素显示出更显著的抗癌活性。此外，狼毒素对Hep-2细胞表现出非常显著的抑制作用，IC50值为1.92μM。2、经(0-4μM)的狼毒素处理过的Hep-2细胞中Akt在473位点的丝氨酸的磷酸化呈现显著的剂量依赖性下降。通过检测BAD，和GSK-3β的磷酸化的减低，证明狼毒素介导的Akt去磷酸化导致Akt激酶活性受到抑制。3、Akt的失活可能与经狼毒素作用后IGF-1Rα水平的下调和它的自动磷酸化受到抑制有关。4、狼毒素作用后显著减少了caspase-9和caspase-3的活性，证明狼毒素可能通过诱导细胞凋亡来抑制Hep-2细胞的生长和增殖。5、在动物实验中，灌饲狼毒素的裸鼠的瘤体显著缩小(P<0.05)。6、通过凋亡检测显示狼毒素可在荷Hep-2细胞裸鼠的瘤体内引起细胞凋亡。7、经狼毒素灌饲作用后的裸鼠移植瘤中Akt，p-Ser473-Akt，GSK-3β，p-GSK-3β，BAD，p-BAD-Ser136，pro和cleaved-caspase-9，pro和cleaved-caspase-3的蛋白表达均呈现与体外细胞实验一致的变化。 结论：狼毒素可以抑制体外及体内人Hep-2喉癌细胞生长，其机制最有可能为直接通过AKT信号通路发挥其潜在的抗肿瘤作用。因此，狼毒素也许可以作为一种新的治疗喉癌的化疗药物。