论文部分内容阅读
目的： B细胞淋巴瘤是来源于B细胞的实体肿瘤，分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。伯基特淋巴瘤(BL)在世界卫生组织(WHO)的淋巴瘤分类中被划分为具有高增殖指数的B细胞非霍奇金淋巴瘤，相关研究发现在90％的BL中存在免疫球蛋白基因位点的c-Myc重排，表明其恶性程度与c-Myc密切相关。近年来发现越来越多的超保守RNA（T-UCRs）在肿瘤的形成与发展机制中发挥重要作用。本课题组前期研究发现在不同c-Myc表达量的伯基特淋巴瘤模型中，部分T-UCRs有明显表达差异，本课题旨在进一步筛选与c-Myc相关的T-UCRs，并探讨uc.477+在B淋巴瘤细胞中的功能与机制。 方法： 1.在B细胞淋巴瘤细胞系及Myc-on淋巴瘤组织中，采用链特异性RT-PCR检测芯片中筛选出的12个T-UCRs，并与普通RT-PCR方法检测的结果进行比较。选取其中的uc.477+进行进一步研究。 2.构建uc.477+的过表达质粒uc.477+-MSCV-PIG，将质粒转染至293T细胞并包装得到病毒，感染小鼠B淋巴瘤细胞株38B9细胞以及人B淋巴瘤细胞株Romas细胞株，经嘌呤霉素筛选，使uc.477+在细胞中过表达，并用流式细胞仪检测阳性表达率，建成稳定高表达uc.477+的B细胞淋巴瘤细胞株。 3.通过细胞计数检测uc.477+过表达对B细胞淋巴瘤细胞的增殖的影响，并与感染空载体的细胞作比较;利用流式细胞计数检测uc.477+对B细胞淋巴瘤细胞的细胞周期和凋亡的影响;将过表达uc.477+及空载体pMSCV-PIG的38B9细胞经皮下注射至BALB/c小鼠，进行荷瘤，观察肿瘤的生长速度，两周后取瘤组织，测量体积与重量。 4.检测uc.477+的宿主基因PLP1在正常小鼠B细胞、小鼠B淋巴瘤细胞(38B9，myc3)中以及在过表达uc.477+和空载体的38B9细胞中的表达情况，探讨uc.477+与其宿主基因之间可能的关系。检测uc.12+A的宿主基因SFPQ在B淋巴瘤细胞株中的表达情况，探讨uc.12+A与SFPQ之间的关系。 结果： 1.链特异性RT-PCR检测结果显示uc.477+、uc.12+A、uc.388+在小鼠B淋巴瘤细胞(38B9，myc3)以及Eu-myc小鼠的自发性B淋巴瘤中表达增高，其中uc.477+上调趋势显著，所以选取uc.477+作为进一步的研究对象。 2.选取多个来自正义链和反义链上的T-UCRs用链特异性RT-PCR和普通RT-PCR检测表达并进行结果比对，以验证链特异性RT-PCR方法的可靠性。发现uc.31+、uc.142+A、uc.468+A在myc3细胞株中链特异性反转录组的表达下调;uc.388+与uc.12+A的链特异性RT-PCR组表达比非特异性RT-PCR组低，但在这两种检测方法中，uc.388+与uc.12+A在淋巴瘤细胞株(38B9)中表达上调的总趋势没有改变，说明链特异性RT-PCR可排除来自另一条链上的RNA干扰，检测结果更为精准。 3.体外检测38B9细胞和Romas细胞过表达uc.477+后与MSCV对照组比较，发现细胞增殖加快，凋亡减少，细胞周期显示G0-G1期减少，G2-M期增高。体内检测38B9细胞过表达uc.477+后肿瘤组织与对照组相比，重量与体积明显增大。 4.RT-PCR检测结果显示uc.477+的宿主基因PLP1在B淋巴瘤细胞株中的表达增高，PLP1在过表达uc.477+的38B9中表达增高。同时也发现uc.12+A的宿主基因SFPQ在B淋巴瘤细胞中表达增高，SFPQ在过表达uc.12+A的B淋巴瘤细胞株中高表达，uc.12+A与SFPQ在正常B细胞与B淋巴瘤细胞中表达呈显著正相关。流式检测发现在B淋巴瘤细胞株38B9细胞中过表达uc.12+A，细胞的增殖分裂速度加快。 结论： uc.477+与uc.12+A在B淋巴瘤细胞中表达增高，具有促进B细胞淋巴瘤细胞生长的作用.