【摘 要】
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植酸及其盐类广泛存在于自然界的各种植物组织和粮食产品中,是磷和肌醇的主要存储形式,同时对保持机体磷的平衡起重要作用.植酸酶作为一种单胃动物的饲料添加剂,可以提高植物
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植酸及其盐类广泛存在于自然界的各种植物组织和粮食产品中,是磷和肌醇的主要存储形式,同时对保持机体磷的平衡起重要作用.植酸酶作为一种单胃动物的饲料添加剂,可以提高植物饲料中磷的利用率,减少磷排泄对环境的污染,同时还能降低植酸的抗营养作用.该文采用PCR方法从黑曲霉NR13染色体DNA中扩增得到植酸酶基因(phyA),克隆至载体pMD18-T上,构建了重组质粒pMD18-T-phyA.对pMD18-T-phyA上插入的植酸酶基因外源片段进行了测序和序列分析.测序结果表明:黑曲霉NR13植酸酶结构基因由1506个核苷酸残基组成,编码467个氨基酸,与报道基本相同.将该序列提交NCBI GeneBank,获得Accession Number为AY513749.对植酸酶进行的同源模建表明黑曲霉NR13植酸酶属于组氨酸酸性磷酸酶家族.把植酸酶基因连接到毕赤酵母穿梭载体pPIC9上,构建了重组质粒pPIC9-phyA.将其电击转化毕赤酵母SMD1168得到重组转化子,PCR扩增证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中.SDS PAGE分析和表达产物的酶活性研究证明,植酸酶有效分泌和高效表达,酶活达到5800U/mL,比出发菌株提高13.3倍,表达产物具有正常的生物学活性,与天然植酸酶性质基本一致.
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