论文部分内容阅读
目的 围生期窒息所致缺氧缺血性脑损伤，常危及新生儿生命并留有严重神经系统后遗症，已成为新生儿期危害最大的常见病。近年研究发现，TGF-β1在新生儿HIBD发病机制中起重要作用，本实验通过制备新生大鼠HIBD模型，侧脑室内注入外源性转化生长因子β1(TGF-β1)，观察不同剂量的TGF-β1对HIBD新生大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响，探讨TGF-β1神经保护作用的分子机制，以期为临床治疗新生儿HIBD提供有效的方法和途径。
方法 1.制备HIBD模型：将新生7日龄Wistar大鼠行颈正中切口，分离结扎左颈总动脉后给予低氧(8％O2)处理2小时，制成HIBD模型。观察缺氧时动物行为变化，并于光镜下观察脑组织病理改变。
2.行为能力检查：分别于手术前、缺氧后1小时对每只大鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。
3.Bcl-2及Bax蛋白表达测定：48只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、生理盐水对照组，TGF-β1干预组，其中TGF-β1干预组又分大、中、小剂量三组，每组8只动物，于缺氧缺血后2小时侧脑室给药，应用免疫组织化学染色方法，观察24小时后Bcl-2及Bax蛋白表达变化。
结果 1.行为能力检查：术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定，48只全部正常。缺氧后1小时假手术组测定结果同前。经历缺氧缺血的40只大鼠，24只不能翻身，33只出现夹尾左旋，18只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。
2.HE染色及光镜检查结果假手术组：脑组织无明显神经元损伤表现，细胞形态正常，未见水肿和变性坏死的神经元。
HIBD组：脑水肿明显，神经元排列紊乱，胞体皱缩，胞浆深染，核浓缩，结构不清，伴胶质细胞增生。
3.Bcl-2蛋白表达检测结果Bcl-2蛋白在假手术组中存在低水平表达，HIBD后表达明显增高，TGF-β1干预组较生理盐水对照组及HIBD组更高。生理盐水对照组与HIBD组相比，TGF-β1大、中、小剂量三组两两相比无显著性差异(p＞0.05)。其余各组间比较均有显著性差异(p＜0.05)。
4.Bax蛋白表达检测结果Bax蛋白在假手术组中表达微弱，HIBD后表达明显增高，TGF-β1干预组较生理盐水对照组及HIBD组表达降低。生理盐水对照组与HIBD组相比，TGF-β1大、中、小剂量三组两两相比无显著性差异(p＞0.05)。其余各组间比较均有显著性差异(p＜0.05)。
5.Bcl-2/Bax比值的变化Bcl-2/Bax比值在脑组织缺氧缺血性损伤后降低，TGF-β1干预后又升高。生理盐水对照组与HIBD组相比，TGF-β1大、中、小剂量三组两两相比无显著性差异(p＞0.05)。其余各组间比较均有显著性差异(p＜0.05)。
结论 1.通过对HIBD后动物行为能力观察及脑组织病理学检查，证实新生鼠HIBD模型制作成功。
2.TGF-β1通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2及下调促凋亡蛋白Bax表达，改变Bcl-2/Bax比值，抑制细胞凋亡从而起神经保护作用，为TGF-β1临床治疗HIBD提供了更深层次的理论依据。