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目的:以山莓(Rubus corchorifolius L.f.)的根部为研究对象,对其进行以下研究:1.对山莓根成分进行分析。2.比较不同产地的山莓根成分间差异。3.建立山莓根含量测定方法。4.优化山莓根总多酚提取工艺,研究其抗氧化活性。5.研究山莓根抗肿瘤能力,并探究其作用机制。方法:1.采用液相色谱质谱联用技术,通过分子量和特征结构碎片信息,对其成分进行分析。2.采用高效液相色谱法建立山莓根指纹图谱,并通过化学模式识别技术,比较不同产地间成分的差异。3.采用高效液相色谱法,建立山莓根含量测定方法。4.采用响应面Box-Benhken试验,优化山莓根总多酚提取工艺,并进行体外抗氧化试验。5.采用CCK-8法检测山莓根对肝癌SMMC-7721细胞、肺癌H460细胞、结肠癌SW480细胞和宫颈癌Hela细胞抗肿瘤活性;通过流式细胞术分析山莓根对宫颈癌Hela细胞周期和凋亡的影响。应用Western blot法分析山莓根对肿瘤细胞蛋白的影响。结果:1.液质联用实验结果显示,对山莓根中化学成分进行分析,推测了其中13种化合物,分别为2,3-HHDP-glucose或4,6-HHDP-glucose(1),Pedunculagin(2),Catechin(3),Sanguiin H10(4),Lambertianin C(5),Sanguiin H6(6),Ellagic acid 2-O-arabinoside(7),Ellagic acid2-O-β-xylopyranoside(8),Ellagic acid(9),Suavissimoside F1(10),Barrinic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester(11),2α,3β,19α-Trihydroxy-12-ursene-23,28-dioic acid(12),23-Hydroxytormenti acid(13)。2.建立了山莓根指纹图谱,确立起色谱条件:色谱柱为Phenomenon Germini C18(5μm,4.6×250nm);检测波长为:255nm;柱温:25℃:流动相为:乙腈-0.1%冰乙酸;流速为0.4ml/min;梯度洗脱125min。此色谱条件下,精密度、稳定性和重复性试验RSD值均<3%,稳定性试验显示供试品溶液在12h内基本稳定。18批不同产地山莓根建立初步共有模式相似度与对照指纹图谱相似度17批都在0.9以上,相似性良好,化学成分分布比较稳定。PCA和OPLS-DA试验发现山莓根中6种差异性成分造成较大贡献度,其中鞣花酸是产地鉴别最重要的标识物。3.建立山莓根含量测定方法,其色谱条件为:色谱柱:Phenomenon Germini C18(5μm,4.6×250nm);检测波长为:255nm;柱温:25℃:流动相为:乙腈-0.1%冰乙酸(17.2:82.8);流速为0.5ml/min;等度洗脱50min,该方法精密度、稳定性、重复性良好,平均加样回收率合格,且18批不同产地山莓根产地含量存在一定差异。4.优化出山莓根总多酚最佳提取工艺:乙醇浓度51.71%、提取时间59.82min、料液比1:59.99、提取温度51.60℃,此时山莓根中总多酚的提取率:22.2149mg/ml。山莓根总多酚浓度为3mg/ml时其总抗氧化能力为128.87U/m L,DPPH自由基清除率为76.29%,超氧阴离子自由基O2·-清除率为70.23%,对羟自由基的清除率为86.83%,并且其清除能力都随浓度的增加而增大。5.山莓根提取物对人肝癌细胞(SMMC-7721)、人肺癌细胞(H460)、人结肠癌细胞(SW480)和人宫颈癌细胞(Hela)均具有增殖抑制作用,其IC50分别为:116.96μg/m L、249.28μg/m L、284.97μg/m L、682.96μg/m L,其对人宫颈癌细胞Hela抑制作用最优。山莓根提取物作用于Hela细胞机理主要通过影响Hela细胞周期分布,将细胞周期阻滞在S期;促进细胞凋亡,上调促凋亡蛋白P53、Bax、Caspase-3蛋白的表达,且下调蛋白Bcl-2的表达。结论:推测出山莓根中13种化合物,建立了指纹图谱和含量测定方法,为山莓根质量控制提供依据。了解山莓根提取物抗氧化和抗肿瘤的药理作用,为进一步开发和应用山莓根资源提供科学依据。