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小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)引起的一种以高热、肺炎及肠炎为特征的烈性传染病。PPRV为有囊膜的单股负链RNA病毒,属于副粘病毒科麻疹病毒属成员。热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)是一类细胞中较为保守的分子伴侣蛋白,它能够为蛋白质合成过程中的正确折叠提供重要的协助。当有机体受到热应激、葡萄糖饥饿或病毒感染等应激时,热休克蛋白被大量诱导表达,从而保护机体免受损伤。根据分子量的不同,热休克蛋白可分为小分子量HSP家族、HSP60家族、HSP70家族和HSP90家族。目前,有关热休克蛋白与病毒感染的关系有不少研究,但有关PPRV感染后热休克蛋白的变化规律还未见报道。本研究用PPRV感染山羊胎儿成纤维细胞(GFF),研究HSP表达变化及其对PPRV增殖的影响,为PPRV相关研究提供科学依据。本试验结果如下:1.GFF感染PPRV后细胞内热休克蛋白的表达变化。PPRV感染GFF后,通过Real time PCR及Western blot方法检测不同时间点热休克蛋白HSP32、HSP70和HSP90的变化情况。结果表明,GFF感染PPRV后随着病毒表达量的升高,HSP32、HSP70和HSP90的mRNA和蛋白表达均有不同程度变化,但只有HSP70表达水平与PPRV增殖呈正相关,而HSP32和HSP90的表达与PPRV的增殖无明显相关性。此外,在细胞Vero上,随着病毒表达量的升高,HSP32表达量先升高后下降,HSP70和HSP90表达量不断下降,这说明宿主细胞和模式细胞二者作用机制可能不同。2.过表达HSP70,PPRV增殖明显上升。成功构建慢病毒载体pCDH-CMV-HSP70,转染GFF细胞后HSP70的表达量明显升高。Western blot检测结果显示在GFF细胞中,随着HSP70表达量的增高,PPRV的N蛋白水平也明显升高。结果表明,HSP70在细胞中的表达量与PPRV的增殖水平呈现正相关性,HSP70蛋白对PPRV的增殖有明显的促进作用。3.抑制HSP70的表达,PPRV增殖明显下降。分别用HSP70蛋白特异性抑制剂槲皮素和HSP70的慢病毒干扰重组载体转染GFF细胞后接种PPRV,检测病毒增殖情况。结果表明,随着HSP70表达量的下降,PPRV的N蛋白表达水平明显下降。综上所述,热休克蛋白家族中,HSP70与PPRV感染有明显相关性。GFF感染PPRV后HSP70表达上调,PPRV在细胞中的增殖与细胞中HSP70表达水平呈正相关。研究结果为抗PPRV药物的研发提供了重要的参考靶点,也为小反刍兽疫的防治提供了新思路。