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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)是lipocalin超家族的成员,其分子量为25KD,在炎症或慢性恶性肿瘤环境中,人体器官组织(如子宫、唾液腺、肾、乳腺、消化道上皮等)均可诱导产生NGAL,正常的肾脏、肺、胃、大肠等组织的NGAL表达水平较低,但当这些上皮细胞受损时,NGAL被诱导而大量表达。NGAL分子量小、不容易降解,在尿中比较容易检测。近年来国外大量报道NGAL是AKI早期的一种敏感性及特异性较高的生物学指标,其评价肾脏急性受损的价值优于肌酐、血尿素、尿酸和内生肌酐清除率。但目前国内用于实验的NGAL的单克隆抗体绝大多数为进口抗体,其价格昂贵,而国内生产的的多为多克隆抗体,其特异性较差,上述原因均制约了关于NGAL的研究。目的：采用杂交瘤单克隆抗体技术制备NGAL单克隆抗体,建立能够稳定分泌NGAL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,从而大量制备NGAL单克隆抗体,初步建立抗NGAL双抗体夹心ELSIA检测方法。方法：用纯化重组的NGAL蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经过克隆化和筛选,建立稳定分泌抗NGAL的杂交瘤细胞株,并通过动物体内诱生腹水大量制备单克隆抗体,利用ELISA、Western Blot等方法鉴定单克隆抗体的性质。将抗体行硫酸铵沉淀及亲和纯化,SDS-PAGE染色鉴定纯化后抗体的纯度,同时对纯化后抗体HRP标记后行抗体配对实验。结果：1、采用杂交瘤技术,筛选出4株稳定分泌抗重组蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B1、7B6、9A11、9F1。将这4株细胞注射于小鼠腹腔得到了富含NGAL单克隆抗体的小鼠腹水。2、SDS-PAGE染色表明纯化后的抗体纯度高3、抗体配对实验表明9A11和7B6以及5B1和7B6能配对成功。结论：1、利用重组的NGAL抗原成功制备了鼠抗人NGAL单克隆抗体。2、抗NGAL双抗体夹心ELSIA检测方法初步建立