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第一部分、Mfn2对小鼠卵母细胞体外成熟及质量的影响 目的：观察Mfn2-siRNA对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟及质量的影响。 方法：使用 Mfn2-siRNA及对照序列（Cy3-siRNA）合成化学修饰的siRNA，分别转染至小鼠卵巢分离的未成熟卵母细胞中，相同条件下未处理的未成熟卵母细胞作为对照，通过荧光定量 PCR及western blot检测干扰效率并观察三组中未成熟卵母细胞的成熟率及受精率，通过免疫荧光检测MⅡ期卵母细胞纺锤体的形态，大小及位置，评价卵母细胞减数分裂情况。 结果：PCR及western blot检测结果显示，Mfn2的表达量在Mfn2-siRNA转染组显著低于Cy3-siRNA转染组及未处理组（P<0.05）；未成熟卵母细胞体外培养16h后，第一极体排出率在Mfn2-siRNA转染组（54.7％）较Cy3-siRNA转染组（73.1%）及未处理组（81.3%）显著降低（P<0.005），受精后两细胞形成率Mfn2-siRNA转染组（61%）同样显著低于Cy3-siRNA转染组（67.8%）及未处理组（77.5%）（P<0.01）。Mfn2-siRNA转染组纺锤体形态发生明显异常，微管排列紊乱，分开的同源染色体没有随第一极体排出；Cy3-siRNA转染组及未处理组纺锤体呈两端逐渐变细的梭形，靠近卵母细胞膜。 结论：Mfn2-siRNA转染组的卵母细胞与Cy3-siRNA转染组及未处理组相比，其成熟率及受精率显著降低，表明Mfn2表达水平下降明显影响卵母细胞体外成熟及质量；纺锤体形态及染色体分布异常表明Mfn2表达下降时卵母细胞的减数分裂受到严重影响，因此，Mfn2的正常表达对卵母细胞的成熟和质量具有重要作用。 第二部分、Mfn2影响小鼠卵母细胞体外成熟及质量的机制探讨 目的：观察Mfn2基因沉默后对小鼠卵母细胞成熟及受精过程中线粒体功能的影响，探讨Mfn2影响小鼠卵母细胞体外成熟及质量的作用机制。 方法：收集小鼠未成熟卵母细胞并分别转染Mfn2-siRNA和Cy3-siRNA，Q-PCR检测两组线粒体基因ND1与核基因β-actin的相对表达量，比较两组卵母细胞中mtDNA含量，用JC-1染料检测IVM16小时后的卵母细胞线粒体膜电位，用mito-tracker green检测卵母细胞中线粒体的分布状态。 结果：Mfn2-siRNA转染组线粒体扩增倍数明显低于Cy3-siRNA组，差异有统计学意义（P<0.01）；Mfn2-siRNA转染组线粒体膜电位明显低于Cy3-siRNA转染组；Mfn2-siRNA转染组线粒体分布异常，20%卵母细胞的线粒体在纺锤体周围聚集，44.2%的卵母细胞呈散点状分布于胞质中，16.8%卵母细胞呈现不固定分布；Cy3-siRNA转染组线粒体分布正常，67%卵母细胞其线粒体呈片状聚集于纺锤体周围及环状分布于胞质近膜周，22.7%卵母细胞的线粒体在胞质内散在分布，10.2%的卵母细胞的线粒体呈现不固定分布。 结论：与对照组相比，Mfn2-siRNA转染组mtDNA扩增倍数较对照组显著降低，说明抑制Mfn2的表达对线粒体复制及结构功能造成影响；Mfn2-siRNA转染组线粒体膜电位降低说明下调Mfn2的表达后线粒体活动减弱，线粒体能量代谢下降；Mfn2-siRNA组线粒体分布状态异常，说明Mfn2表达下调能影响线粒体形态及分布。因此，Mfn2可能通过调控线粒体扩增数量、能量代谢及分布状况参与卵母细胞的体外成熟及质量。