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牛乳头状瘤病毒(Bovine Papillomavirus,BPV)是牛乳头状瘤病的病原体,BPV能够引起牛的皮肤、黏膜上皮增生性病变,目前BPV已呈全球内流行趋势,带给了养牛业巨大的经济损失。当前防治牛乳头状瘤病的方法有外科手术治疗法、中药治疗法及疫苗免疫法等。本研究利用BPV感染C127细胞,建立细胞感染模型,进行牛乳头状瘤病防治药物的体外筛选,为牛乳头状瘤病的临床治疗提供理论基础及试验依据。试验选取临床典型的牛乳头状瘤组织,对其进行光镜及电镜观察,通过间接ELISA法检测肿瘤组织中BPV,并进行PCR扩增、测序确定其基因型;BPV野毒株感染C127细胞,利用光镜对比观察细胞形态学变化,透射电镜观察细胞内病毒粒子分布;以利巴韦林作为阳性对照药物,通过实时荧光定量PCR法检测苦参碱及氧化苦参碱对BPV直接灭活作用、抑制BPV在细胞内增殖作用及预防BPV对细胞的感染作用,评价苦参碱及氧化苦参碱对BPV的作用效果;利用细胞流式技术检测药物作用后,对染毒细胞的凋亡影响,探索药物作用机制。结果表明:光镜观察可见肿瘤组织呈多个指状突起,每个突起的中心为纤维组织和血管,突起外为多层鳞状上皮细胞,异型性低,未见明显角化,且无异常核分裂象。透射电镜观察可见肿瘤组织基底细胞、棘细胞及颗粒细胞均出现细胞形状不规则、线粒体空泡状等病理变化。间接ELISA法检测肿瘤组织BPV呈阳性反应;经PCR扩增、测序结果与分离自中国的BPV-2病毒SW株(Gen Bank:KC256805.1)L1基因的相似性高达99%。BPV野毒株感染C127细胞,细胞形状变小、细长、生长密集、排列紊乱,PCR检测在450bp左右出现特异条带。细胞透射电镜观察发现病毒粒子,并伴随高尔基体、粗面内质网、线粒体变形等病理变化。通过药物作用后染毒细胞CPE及实时荧光定量PCR检测结果表明具直接抗BPV作用的为:利巴韦林浓度为0.625μg/ml时抑制率最高,可达90%,苦参碱浓度为80μg/ml时抑制率最高,可达98%,与对照组相比差异极显著(P﹤0.01);具预防BPV感染作用的为:苦参碱浓度为80μg/ml时抑制率最高,可达95%,与对照组相比差异极显著(P﹤0.01);具抑制BPV在细胞内增殖作用的为:利巴韦林浓度为0.625μg/ml时抑制率最高,可达93%,苦参碱浓度为80μg/ml时抑制率最高,可达95%以上,与对照组相比差异极显著(P﹤0.01);而氧化苦参碱药物最大无毒浓度的三种作用途径对BPV的抑制率均低于30%,视为无效。BPV感染细胞24h时,己经开始抑制细胞凋亡,且细胞主要处于晚期凋亡,同时苦参碱的三种给药途径处理BPV,均对细胞晚期凋亡具有一定促进作用。结论:苦参碱直接作用于BPV可使其活性丧失,苦参碱又具有抑制BPV在细胞内增殖及预防BPV感染的作用。