乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其机制

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目的观察不同浓度乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin(GF)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,初步探讨其作用机制。方法体外培养肺腺癌A549细胞,将细胞分成对照组(无GF处理组),实验组(GF处理组,浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L),分别作用24、48 h后,应用CCK-8法检测GF对A549细胞的增殖抑制率。使用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)GF处理A549细胞,作用24 h后,应用划痕实验检测GF对A549细胞迁移能力的影响;应用Transwell实验检测GF对A549细胞侵袭能力的影响;使用乳酸脱氢酶活性检测试剂盒检测GF对乳酸脱氢酶活性的影响;使用乳酸定量试剂盒检测GF对乳酸生成量的影响;ELASA法检测GF对A549细胞上清液及细胞内的E-钙粘蛋白(E-cad)及波形蛋白(VIM)表达水平的影响。结果CCK-8结果表明,对照组与实验组之间A549细胞的增殖抑制率差异明显,差异有统计学意义(P<0.05);在相同作用时间(24、48 h)情况下,实验组的增殖抑制率高于对照组,随着GF浓度的增加,增殖抑制率增高,差异有统计学意义(P<0.05);在相同GF浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)情况下,48 h的增殖抑制率高于24 h,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验结果表明,实验组细胞迁移率小于对照组(P<0.05),随着GF浓度的增加,迁移率逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell结果表明,实验组细胞侵袭细胞数小于对照组,随着GF浓度的增加,侵袭细胞数逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。乳酸脱氢酶活性检测结果表明,实验组乳酸脱氢酶活性较对照组显著降低,随着GF浓度的增加,乳酸脱氢酶活性逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。乳酸检测结果表明,实验组乳酸生成量较对照组显著减少,随着GF浓度的增加,乳酸生成量逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA结果显示,与对照组相比,各浓度GF干预组细胞培养上清液中和细胞内E-cad蛋白浓度均显著增高,并且随着GF浓度增加,细胞上清液中E-cad蛋白浓度逐渐增高,各干预组间差异有统计学意义(F=148.2,P<0.05),细胞内E-cad蛋白浓度逐渐增高,各干预组间差异有统计学意义(F=355.1,P<0.05);与对照组相比,各浓度GF干预组细胞培养上清液中和细胞内VIM蛋白浓度均显著降低,并且随着GF浓度增加,细胞上清液中VIM蛋白浓度逐渐降低,各干预组间差异有统计学意义(F=675.7,P<0.05),细胞内VIM蛋白浓度也逐渐降低,各干预组间差异有统计学意义(F=140.5,P<0.05)。结论GF在体外能够抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭,其机制可能是GF通过抑制有氧糖酵解及上皮间质转化。
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