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本研究结合细菌学鉴定和16SrDNA序列分析法确定了乳酸杆菌LB-19(LB-19)的分类地位,近而研究了LB-19及其耗尽培养上清(Spent CuLture Supematant.SCS)对产肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxingenic E.coli,ETEC)和猪霍乱沙门氏菌(SalmonellaCholeraesuis,S.Choleraesuis)的体外抑制作用,对LB-19粘附人结肠癌上皮细胞(Caco-2),以及排斥、竞争与置换ETEC和S.Choleraesuis粘附该细胞的拮抗作用进行了研究。
鉴定结果显示,LB-19与约氏乳酸杆菌(Lactobacillus Johnsonii)的形态学特征及生理生化反应结果极为相近,两者的16SrDNA基因序列同源性也高达99％,因此最终确定并命名该菌株为约氏乳酸杆菌LB-19(Lactobacillus Johnsonii LB-19)。
体外抑菌实验证实,当LB-19与ETEC和S.Choleraesuis按不同比例混合培养16h时,1:1混合培养的的LB-19对ETEC和S.Choleraesuis的抑制率达99.32％和99.65％,且此抑制率随混合液中LB-19菌体的增多而增大;当混合培养24h后,LB-19对两种致病菌的抑制率均达100.00％。SCS抑菌结果显示,只有pH值＜4.0的SCS才能对ETEC和S.Choleraesuis产生明显的抑制作用,且pH越低,抑菌效果越好。而pH2.0的SCS对ETEC和S.Choleraesuis的抑菌效果(18.6±0.15mm和20.5±0.28mm)约为相同pH的纯HC1溶液抑菌效果(7.83±1.10mm和8.00±1.23mm)的2.5倍。
粘附试验证实,用SCS悬浮的LB-19对Caco-2细胞的粘附数(25.05±3.92个菌/细胞)约为同等条件下用DMEM液悬浮的粘附数(11.51±3.20个菌/细胞)的2倍:在1.0×107CFU/mL～1.0×109CFU/mL的浓度范围和0.5-6h的粘附时间内,LB-19对Caco-2细胞的粘附数随LB-19浓度的增大显著上升,当浓度大于1.0×10pCFU/mL和粘附6h后,粘附数增长趋势明显减缓。同时,1.00×109CFU/mL的LB-19对ETEC和S.Choleraesuis的粘附都有很强的排斥、竞争和置换作用,粘附抑制率分别达99.96％、99.97％、99.88％和95.00％、100.00％、99.83％。