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众所周知,磷脂是构成生物膜的主要成分,摄取磷脂酰胆碱(PC)可改善膜磷脂组分,增加膜流动性和膜酶活性,提高细胞的抗氧化能力。Caveolin-1 (窖蛋白-1, Cav-1)是膜脂筏Caveolae(胞膜窖)的标记蛋白。近年发现,磷脂能够促进Caveolin-1小泡的形成及转运,对Caveolae结构的形成和稳定及细胞膜组装具有重要作用。本室前期工作表明,肝脏磷脂酰胆碱(肝PC)含有丰富的烯醚键,能够抵抗脂质过氧化,对小鼠急性酒精肝损伤具有明显的保护作用;同时发现,肝PC能够促进小鼠肝脏中Cav-1蛋白表达,但作用机制尚不完全清楚。本文以张氏肝细胞为对象,利用siRNA技术筛选出稳定传代的Cav-1低表达细胞株(Cav-1KD),建立酒精性肝细胞损伤模型;利用MTT、电导法和薄板层析(TLC)等技术检测酒精损伤的Cav-1KD细胞膜特性及磷脂成份变化的影响;利用Western blot技术确定肝PC预保护的酒精肝损伤细胞中氧化应激途径相关蛋白表达的变化,进一步探讨肝PC对肝细胞酒精性损伤的保护作用与Cav-1的关系,旨在了解由Cav-1蛋白在肝脏损伤修复中的作用和信号转导机制。结果如下:1.酒精作用导致细胞中超氧化物歧化酶(SOD)水平明显降低(P<0.05),并促进氧化应激通路中TLR4、TNF-α、NF-κB表达增高及p38磷酸化激活,引发张氏肝细胞氧化应激。肝PC显著提高张氏肝细胞SOD活性(P<0.05),降低TLR4、TNF-α、NF-κB、P-p38等蛋白表达水平,对肝细胞起保护作用。2.利用RNA干扰技术建立张氏肝细胞模型,发现200mmol/L酒精引起Cav-1低表达细胞ALT释放增加(P<0.05),细胞电导率显著增高(P<0.01),膜PC、PE、SM等含量均降低。提示,Cav-1表达下调导致张氏肝细胞对酒精作用的敏感性明显增高。3.肝PC预保护可以明显提高酒精损伤的Cav-1KD细胞存活率,促进Cav-1及PKCα蛋白表达。结论:肝PC对张氏肝细胞酒精性损伤的保护作用与Cav-1密切相关。Cav-1表达下调导致张氏肝细胞对酒精作用的敏感性增高。肝PC可以通过改变膜磷脂成分,促进Cav-1介导的PKCα信号通路的激活,提高肝细胞膜的抗氧化能力,对抗酒精性损伤。