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目的：探讨大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡与病情严重程度的关系及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、NF-KB的表达情况,观察大鼠急性胰腺炎胰腺病理改变、血清淀粉酶、炎症细胞因子水平等相关指标的变化及通腑方等不同药物治疗的作用环节,以探索急性胰腺炎腺胞细胞凋亡机制及药物治疗的有效途径。
方法：经胆胰管逆行注入不同浓度牛黄胆酸钠,制备大鼠急性水肿性胰腺炎(Acute edematous pancreatitis,AEP)和急性坏死性胰腺炎(ANP)模型,60只SD大鼠随机分为假手术组(SO)、AEP组、ANP的三个治疗组:ANP+通腑方治疗A组(简称T-A组),ANP+通腑方治疗B组(简称T-B组),ANP+善宁组(简称T-S组),共六组。通腑方治疗剂量1ml/100g,善宁治疗剂量1.35μg/100g,T-S组造模前12小时提前给药一次。三个治疗组于建模后30min分别给药一次,六小时后采取标本做病理检测和各项指标检测。检测血清淀粉酶水平,光镜下观察胰腺标本病理改变,进行病理组织学评分,采用TUNEL技术检测胰腺腺胞细胞的凋亡,计算凋亡指数；应用免疫组化检测胰腺组织中Bax、Bcl-2、NF-KB的表达。
结果：
(1)光镜观察,模型组AEP组与ANP组大鼠炎症积分较正常组明显升高(P<0.01),且ANP组高于AEP组(P<0.01)。各ANP的三个治疗组较模型组有所改善,其中胰腺组织水肿和炎细胞浸润分别较ANP显著减轻(P<0.01),胰腺组织腺胞坏死和出血程度比较亦有减轻(P<0.05),尤以T-B治疗组效果最好。
(2)淀粉酶水平：各组血清淀粉酶水平均有不同水平的上升,AEP与ANP组与SO组显著升高(P<0.01),ANP组高于AEP组(P<0.05),治疗组T-A组、T-S组与ANP组比较(P<0.01),T-B组与ANP比较(P<0.05)。
(3)TUNEL标记显示:SO组仅见少量凋亡细胞,AEP组与ANP组凋亡指数(AI)显著高于SO组,ANP组显著低于AEP组(P<0.01),各治疗组显著高于ANP组(P<0.01)。
(4)免疫组化染色显示Bax、Bcl-2表达的变化:Bax在假手术组几乎未见表达,AEP与ANP较SO组表达明显增加,且ANP组Bax的表达量显著低于AEP组(P<0.01),各治疗组Bax表达水平高于ANP组(P<0.01),尤以T-B组明显。Bcl-2在假手术组几乎未见表达,AEP组与ANP组较SO组表达量有所增加(P<0.01),且ANP组Bcl-2的表达高于AEP组。ANP的三各治疗组较ANP组表达量继续升高,T-A组与T-S组较ANP组相比(P<0.05),T-B组与ANP比较(P<0.01),以T-B组较为明显。
(5)核因子NF-KB的表达变化:NF-KB表达的阳性部位在胞浆和胞核中,以胞浆为著。正常组少见NF-KB的表达,从AEP组到ANP组,NF-KB表达明显增强。且各组之间比ANP组明显减弱,T-A组较ANP组(P<0.05),T-B组与T-S组较ANP组(P<0.01)
结论：
1.采用微量泵按6ml/h的速度、1 ml/kg的剂量胆胰管内逆行注射0.5％和5％的牛黄胆酸钠的逆胆胰管注射法所诱发的大鼠急性水肿和坏死模型,死亡率低,可重复性好。
2.急性胰腺炎时腺胞细胞的凋亡与病情轻重呈负相关的关系,腺泡细胞凋亡可能是急性胰腺炎时机体的保护机制之一。Bax基因表达水平同腺泡细胞凋亡呈正相关关系,是促进腺泡细胞凋亡的基因。Bcl-2是抑制腺泡细胞凋亡的基因,可拮抗细胞凋亡过度,促进腺泡细泡修复增殖。
3通腑方可上调Bax表达,促进腺泡细胞凋亡减轻胰腺病理损害,降低淀粉酶水平,同时可上调基因Bcl-2和下调NF-KB,有利于拮抗凋亡过度,修复受损细胞,阻断瀑布级联效应。因此若能合理选择药物,作用于AP发病的不同环节,有效的调控腺泡细胞的凋亡,将会为临床进一步降低ANP的重症程度和病死率提供可能。