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目的：
探讨缺氧刺激能否诱导体外培养心肌细胞分泌肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor α，TNF-α），核因子кB（nuclear factor кB，NF-кB）通路是否参与其中发挥调节作用。
方法：
1％O2物理缺氧刺激原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞，在不同时间点采用Real-time PCR(Polymerase Chain Reaction，PCR)检测TNF-αmRNA水平；酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测培养上清中TNF-α蛋白水平；western blot检测心肌细胞胞浆NF-кB相关通路蛋白IKKα，IKKβ，IкBα蛋白及磷酸化蛋白水平以及心肌细胞核NF-кB p65蛋白表达；电泳迁移率实验（e1ectrophoretic mobility shift assay，EMSA）检测细胞核蛋白NF-кB DNA结合能力。缺氧同时给予NF-кB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）刺激心肌细胞，检测心肌细胞核p65蛋白表达，TNF-αmRNA及蛋白水平。
结果：
缺氧诱导原代培养心肌细胞表达TNF-α，TNF-αmRNA水平从缺氧1h开始升高，12h及24h达峰值；其蛋白分泌从缺氧6h开始升高，缺氧12h和24h达峰值。缺氧激活NF-кB通路：缺氧5min胞浆pIKKα/IKKβ表达开始上调，30min达峰值，持续6h；IкBα表达缺氧5min开始降低，而pIкBα水平缺氧30min开始增加；胞核p65水平缺氧5min明显上调，1h达峰值，持续6h；NF-кB DNA结合能力缺氧5min开始增强。PDTC抑制NF-кB活性，有效抑制TNFαmRNA水平及其蛋白表达。
结论：
缺氧通过激活NF-кB通路，诱导心肌细胞自分泌TNF-α，NF-кB在缺氧诱导心肌细胞自分泌TNF-α过程中起正向调节作用。