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Toll样受体(Toll like receptors，TLRs)是一种主要表达于树突状细胞(Dendritic cells，DCs)、B细胞、巨噬细胞等免疫细胞的病源模式识别受体，其通过识别不同的病原微生物活化特异的信号通路，能够激活天然免疫和获得性免疫从而调节机体的免疫反应。目前，哺乳动物中已发现的TLRs有13种，人类中有10种，小鼠中有13种。其中，TLR9通过识别未甲基化的富CpG-DNA介导机体对病毒、细菌的清除，在多种免疫性疾病如自身免疫病、肿瘤等中发挥关键作用，是治疗疾病的关键所在。DCs是体内功能最强的专职抗原递呈细胞，在天然免疫和适应性免疫的衔接中起着关键的作用。含CpG基序寡核苷酸(CpG-ODN)可激活DCs的TLR9通路促进其成熟并影响DCs的免疫功能。目前临床上用于调控DCs的TLR9信号通路的药物非常有限且并不完善，因此寻找新的有效的小分子药物有望弥补治疗手段的不足。 本实验室前期实验表明，D181可以抑制TLR4信号通路的活化，调控相关炎症因子的产生，改善TLR4通路相关疾病脓毒症的症状。本课题以小鼠骨髓诱导来源的树突状细胞作为研究对象，研究D181对CpG诱导活化的树突状细胞的影响并探讨D181对DCs的TLR9通路的调控机制。 首先我们用CCK8法检测D181对BMDCs的细胞毒性，结果显示一定浓度内的D181(0-200μM)对细胞的活力没有影响。接着我们用AnnexinⅤ/PI双染法检测D181对BMDCs凋亡的影响，发现在0-200μM范围内D181不影响BMDCs凋亡。随后我们用实时荧光定量PCR检测D181对CpG刺激的BMDCs分泌的促炎性细胞因子（IL-12，IL-6，CXCL-10和TNF-α）在mRNA水平表达的影响，显示D181能够抑制CpG引起的BMDCs促炎性细胞因子的表达，其中D181对CXCL-10表达的抑制效果最为明显。CXCL10(interferon-γ inducible protein10，CXCL-10)是一种属于CXC亚家族的趋化因子，主要表达于成纤维细胞、内皮细胞及DCs等细胞，能够介导DCs与T细胞的相互作用，而且在多种疾病如SLE、AR、肿瘤等的发生发展中发挥重要作用。CXCL-10与DCs的功能相关，因此我们用流式细胞术检测BMDCs表面标志(CD80，CD86，CD40，MHCⅡ)，发现D181可以下调表面标志和共刺激因子的表达。用吞噬实验检测D181对BMDCs细胞吞噬FITC-右旋糖酐能力的影响，发现D181不影响BMDCs的吞噬功能。 为进一步探索D181对CXCL-10产生的影响及其作用机制，我们用不同浓度的D181预处理后加入CpG刺激，检测CXCL-10的mRNA水平和蛋白水平的变化，发现D181能够在转录水平和翻译水平剂量依赖性抑制CXCL-10的表达。为研究BMDCs中CXCL-10变化的作用，用Transwell实验检测D181对BMDCs趋化T细胞能力的影响，发现与单独CpG刺激相比，加入D181后BMDCs趋化T细胞的能力明显下降。为研究D181发生作用的机制，用ERK、JNK、p38和STAT1的通路抑制剂预处理BMDCs，检测CpG刺激BMDCs引起的CXCL-10的mRNA及蛋白水平的变化，结果显示这些处理均可以明显降低CXCL-10的表达。接着，用Western blot分析D181对ERK、JNK、p38和STAT1通路活化的影响，发现其能够明显抑制ERK、JNK、p38和STAT1的磷酸化。 综上所述，首次发现小分子化合物D181能够通过调控TLR9通路抑制CpG引起的BMDCs的成熟和功能，并可以调控CXCL-10的表达，且主要通过MAPK和STA1信号通路发挥作用，这就提示我们D181可能会成为治疗CXCL-10相关疾病的潜在药物。