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目的:筛选贵州省少数民族常用药红孩儿(《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)收载品种,为秋海棠科秋海棠属植物红孩儿Begonia palmataD.Don var.bowringinan(Champ.ex Benth.)J.Golding et C.Kareg.或盾叶秋海棠Begonia cavalerei Lévl.的新鲜或干燥根茎)的抗炎、镇痛等药效物质;提升红孩儿药材的质量标准;建立该药材的指纹图谱研究方法。为该药材及其相关中药产品的质量控制和合理利用提供了科学依据。
方法:1、采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验进行抗炎实验,采用醋酸扭体法进行镇痛实验,采用测定小鼠断尾出血时间(BT)进行小鼠凝血时间实验,对红孩儿药材的乙醇提取物、水提物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物以及剩余浸膏进行抗炎、镇痛、小鼠断尾出血时间(BT)实验研究。2、照《中国药典》2005版一部附录Ⅵ B薄层色谱法,对红孩儿药材中的有效成分芦丁进行定性鉴别;照《中国药典》2005版一部附录Ⅸ H水分测定法(第一法),测定红孩儿药材水分含量;照《中国药典》2005版一部附录Ⅸ K灰分测定法,测定红孩儿药材的灰分及酸不溶灰分含量;照《中国药典》2005版一部附录ⅩA中的醇溶性浸出物测定法,测定药材的乙醇浸出物含量;照《中国药典》2005版一部附录ⅥD高效液相色谱法,进行提取条件和色谱条件的优化,测定药材芦丁的含量;照《中国药典》2005版一部附录ⅤA紫外-可见分光光度法,进行提取条件考察,采用硫酸-苯酚法于485nm处测定药材中多糖的含量;3、采用高效液相色谱法进行盾叶秋海棠药材的化学指纹图谱研究。
结果:1、盾叶秋海棠的乙醇提取物对醋酸所致小鼠扭体反应有明显的抑制作用,并可延长小鼠断尾出血时间(BT)。而盾叶秋海棠的其余不同极性溶剂提取物以及红孩儿的乙醇提取物和水提物均无抗炎、镇痛、延长或缩短小鼠断尾出血时间的活性。2、芦丁的薄层鉴别,以乙酸乙酯-甲酸-水(4∶1∶1)为展开剂展开效果较好,供试品色谱中,在与对照品芦丁色谱相应的位置上,日光下显相同的浅黄色斑点,紫外灯(365nm)下显相同的绿色荧光斑点;红孩儿药材水分不得过10.0%;红孩儿药材灰分不得过13.0%,酸不溶性灰分不得过5.0%;乙醇浸出物不得少于7.0%;红孩儿药材按干燥品计算,含芦丁(C27H30O16)不低于0.10%。对民间常用的秋海棠属药用植物质量对比研究结果表明不同种类、不同产地秋海棠药用植物中芦丁的含量有明显差异,以贵州开阳南江峡谷产盾叶秋海棠地上部分中芦丁的含量为最高,不同部位中芦丁的含量分布为叶、茎>根茎;多数种类均以地下部分多糖含量较高,以贵州仁怀产一点血地下部分中的含量为最高。3、测定的11批盾叶秋海棠样品有13个共有指纹峰,共有指纹峰的相对保留时间从0.0740~1.6520,相对保留时间的RSD为0.18%~1.20%,共有指纹峰面积的RSD为46.64%~81.09%,共有指纹峰面积比值的RSD为43.02%~172.06%。
结论:1、盾叶秋海棠的乙醇提取部位是该药材镇痛和延长小鼠断尾出血时间(BT)的有效部位。2、建立了药材中芦丁的薄层鉴别法、芦丁和多糖的含量测定方法,方法简便可行、重现性好、结果准确,为该药材的质量控制提供了实验依据。3、建立了盾叶秋海棠药材的HPLC对照指纹图谱,可较全面的反映该药材中化学成分的信息,专属性较强,重现性好。另外,综合该类药材不同部位中有效成分芦丁的含量测定分析结果,并从资源的町持续利用角度出发,建议进一步进行相关药效学实验研究,以增加该药材的地上部分入药更为合理。通过对红孩儿药材的质量标准提升研究,保汪了该药材的用药安全、有效及质量可控,提高了我省民族药产品的科技含量,有利于促进我省民族药相关科研基础工作及民族药可持续发展。