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钛胶（TiO2）基质固定相是近年发展起来的新型色谱填料，其具有传统硅胶基质固定相不可比拟的优点。钛胶表面和硅胶相比呈碱性，并且具有极好的化学稳定性，在pH1～14的范围内，即强酸碱条件下都是非常稳定的，而硅胶固定相则仅仅适用于pH3～9的范围内。因此其不存在硅胶固定相对碱性化合物存在“不可逆吸附”的致命缺陷，可以很好地解决碱性化合物在硅胶基质固定相上“拖尾”的大问题，更适合用于生物碱、磷酸蛋白、肽以及其他碱性化合物的分离分析。钛胶基质固定相有望在食品安全、生命科学等领域发挥出硅胶固定相及聚合物固定相所无法替代的巨大潜力，发展此种新型固定相具有重要的理论价值和广阔的应用前景。本文研究了钛胶基质色谱柱在分析阿斯巴甜、几种生物碱及蛋白、肽方面的应用。本课题的内容包括四部分：（1）建立了快速测定无糖可乐中甜味剂阿斯巴甜的钛胶反相高效液相色谱法。色谱条件：分离柱为Titania Sachtopore-RP柱（250mm×4.6mm i.d.，5μm），柱温70℃，流动相为V[15mmol/L磷酸铵缓冲溶液，（NH4）2HPO4：NH4H2PO4=6：4；10mmol/L氟化铵]：V（甲醇）=70：30，流速1.0ml/min，检测波长217nm。线性范围为10～2500μg/mL（R2=0.9994），最低检出限为0.08μg/mL，回收率为92.5%～97.4%，相对标准偏差（n=8）小于0.72%。准确度和精密度均可满足饮料中阿斯巴甜的测定要求。（2）建立了基于钛胶反相柱对饮料中咖啡碱的高效液相色谱快速测定方法。色谱条件：分离柱为Titania Sachtopore-RP柱（250mm×4.6mm i.d.，5μm），柱温30℃，流动相为水：甲醇=83：17（V/V），流速1.0ml/min，检测波长273nm。线性范围为12～900μg/mL（R2=0.9998），最低检出限为0.03μg/mL，平均回收率为100.9%，相对标准偏差（n=9）小于0.23%。本法简单易操作、分析速度快，精密度和准确度均取得满意效果，适用于各种饮料样品中咖啡碱的定量分析。（3）因第二部分中咖啡碱测定效果较好，所以研究了快速同时测定结构相似的可可碱、茶碱、咖啡碱的反相高效液相色谱法。色谱条件：分离柱为Titania Sachtopore-RP柱（250mm×4.6mm i.d.，5μm），柱温60℃，流动相为水：甲醇=95：5（V/V），流速1.0ml/min，检测波长273nm。可可碱、茶碱、咖啡碱的线性范围分别为5～500μg/mL（R2=0.9999）、5～1000μg/mL（R2=0.9997）、6～1200μg/mL（R2=0.9999），最低检出限分别为0.04μg/mL、0.08μg/mL、0.03μg/mL，平均回收率为100.2%、101.1%、100.9%，相对标准偏差（n=9）小于0.37%。本法获得较高的灵敏度、精密度和准确度，结果满意，适用于各种食品样品中可可碱、茶碱、咖啡碱的同时定量分析。（4）在利用TiO2色谱材料富集磷酸肽的基础上，采用钛胶柱为色谱分离柱以可简单操作的色谱条件：柱温为45℃，流动相为50%甲醇：50%水，流速为0.5ml/min，进样体积为5μL，并通过二级质谱确定出了酪蛋白的胰蛋白酶水解产物为11种多肽片段及5种游离氨基酸，多肽片段分别为：His-Pro-Ile-Lys（αs1-酪蛋白，4-7）、Glu-Val-Val-Arg（αs2-酪蛋白，42-45）、His-Ile-Gln-Lys（αs1-酪蛋白，80-83）、Leu-His-Ser-Met-Lys（αs1-酪蛋白，120-124）、Glu-Ala-Met-Ala-Pro-Lys（β-酪蛋白，100-105）、Gly-Pro-Phe-Pro-Ile-Ile-Val（β-酪蛋白，203-209）、Thr-Thr-Met-Pro-Leu-Trp（αs1-酪蛋白，194-199）、Glu-Met-Pro-Phe-Pro-Lys（β-酪蛋白，108-113）、Glu-Asp-Val-Pro-Ser-Glu-Arg（αs1-酪蛋白，84-90）、Val-Asn-Glu-Leu-SerP-Lys（αs1-酪蛋白，37-42）、Thr-Val-Asp-Met-Glu-SerP-Thr-Glu-Val-Phe-Thr-Lys（αs2-酪蛋白，138-149），其中最后两种为磷酸肽，游离氨基酸分别为：Pro、His、Ala、Val、Asp，同时推断出TiO2对于磷酸肽确有富集作用。