论文部分内容阅读
目的：获得较多的纯化真菌菌株并筛选到对多个致病菌有良好抗菌活性且代谢产物丰富的最佳目标活性菌株;初步确定目标活性菌株NJ0115适合的发酵条件、活性产物性质及分离条件;获得菌丝中可能含有激活蛋白的海洋活性真菌。 方法和结果： (1)通过对南麂岛10个海洋沉积物样品的处理，采用稀释平板法和重复平板划线法以及结合真菌形态颜色和镜检，最后分离纯化得到39个海洋真菌菌株，由牛津杯法的抑菌实验获得8株活性真菌，其发酵液对一种或一种以上病原指示菌具有抑菌作用，初筛率为20.5％，其中菌株NJ0115和菌株NJ0121的发酵液对指示菌抑菌效果明显，并作为复筛对象，通过高效液相色谱（HPLC）代谢指纹图谱化学筛选方法分析这2个活性真菌的乙酸乙酯粗提物，可知活性菌株NJ0115的峰数为92个，菌株NJ0121为59个峰，活性菌株NJ0115的峰数较多，是一株代谢产物丰富且能产抗菌活性产物的真菌，具有很大的研究价值，并选为实验研究对象。 (2)通过对菌株NJ0115的培养基、培养时间、摇床转速、培养基初始PH值等这4个不同发酵条件进行实验考察，最终确定最适合的发酵条件为:培养基为真菌1号培养基，初始PH值为6.5至7.5，培养时间为8d，摇床转速为140r/min，这些条件的综合使得对副溶血弧菌(ZP1208016)抑菌直径由19.2 mm增大至24.4mm。通过对菌株NJ0115活性产物性质的初步研究和薄层层析(TLC)分析方法实验，结果显示菌株NJ0115活性产物具有较强的光稳定性，热稳定性为不超过60℃，在pH值为3.5～7.5范围内相对稳定。并确定适合活性物质的萃取剂为乙酸乙酯。薄层层析分析表明;当展开剂为石油醚∶丙酮=2∶1时，菌株NJ0115乙酸乙酯粗提物在层析板上点样并显色，斑点出现较多，说明这种比例的展开剂适合作为活性物质过分离柱的分离溶剂，这些结果为活性产物的进一步分离提供了依据。 (3)有报道表明一些发酵的真菌菌丝含有促进种子发芽作用的激活蛋白，利用这个方法，通过提取真菌菌丝蛋白来处理黄瓜发芽的试验以及结合SPSS统计分析方法，结果显示实验组的第三组与对照组相比有9个真菌样品的P值小于0.05，可知该部分真菌菌丝细胞可能含有促进黄瓜种子发芽的蛋白质，推测可能是激活蛋白。 结论：筛选到了一株代谢产物丰富且对4个致病菌有良好抗菌活性的真菌菌株NJ0115，初步确定了该菌株适合的发酵条件，这些条件的综合发酵提高了菌株NJ0115代谢产物的抑菌效果，说明适合的发酵条件能提高菌株的代谢活性产物量，初步掌握了菌株N J0115活性产物的性质及分离条件;发现了9个真菌样品可能含有激活蛋白，可以为激活蛋白的相关实验提供菌种原料。