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目的:探讨白色念珠菌生物膜对中药胡桃楸水提物的敏感性。白色念珠菌易在人体内形成生物膜且易对抗真菌药物形成耐药,因此首先应该对白色念珠菌在体外形成的生物膜进行形态学观察,以便进一步了解其相关特征。本研究通过体外形成白色念珠菌生物膜结构,观察白色念珠菌生物膜形成过程中不同时期的生长特点及形态特征,并以临床常用抗真菌药物两性霉素B和卡泊芬净为对照药物,比较中药胡桃楸水提物对白色念珠菌生物膜的作用效果,目的在探讨胡桃楸水提物对白色念珠菌生物膜的抑制作用,为临床治疗白色念珠菌感染提供理论依据。
方法:本实验采用6孔培养板,体外培养形成白色念珠菌生物膜结构,在显微镜下观察不同培养时间的生物膜结构特点。另采用96孔培养板,体外培养形成白色念珠菌生物膜,以结晶紫染色法分析生物膜体外生长动力学,以XTT还原法定量测定胡桃楸水提物、两性霉素B和卡泊芬净三种药物抑制白色念珠菌生物膜50%和80%细胞活性的最低药物浓度,比较三种药物抗白色念珠菌生物膜效力。
结果:白色念珠菌生物膜内细胞数量随培养时间延长而增加,最初8h膜内细胞数量增加显著,培养48h时,生物膜内细胞数量达到最高并趋于稳定,镜下可见典型的成熟生物膜结构。2h组与4h组,8h组与12h组,48h组与72h组之间无明显差别(P＞0.05),其他组间具有明显差异(P＜0.05)。生物膜成熟时,细胞数量趋于平衡状态,但仍保持在高水平。随培养时间延长,白色念珠菌生物膜耐药性逐渐增强,而且对药物的浓度具有一定依赖性。生物膜48h成熟时,胡桃楸水提物、两性霉素B和卡泊芬净的SMIC50分别是:1.36g/ml,2.0μg/ml,8μg/ml;SMIC80分别是:1.84g/ml,3.6μg/ml,16μg/ml。
结论:48h后白色念珠菌可在体外培养形成典型成熟生物膜结构。白色念珠菌生物膜对两性霉素B耐药。卡泊芬净对成熟白念珠菌生物膜具有较强的抑制能力。胡桃楸水提物具有抑制初期白色念珠菌生物膜的作用,一般不能明显抑制48h成熟生物膜。