急性一氧化碳中毒对血脑屏障通透性的影响

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:BNBNBN668
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目的:一氧化碳(Carbon monoxide,CO)是一种无色、无味、无刺激性的气体,是有机化合物燃烧后所产生的一种副产品。大气中的CO浓度一般低于0.001﹪,CO与血红蛋白的亲和力是氧气与血红蛋白亲和力的200-250倍以上,因此当CO中毒后,导致氧血红蛋白解离曲线的转变,由于竞争性抑制CO与血红蛋白结合,减少氧气的输送,随后组织缺氧。CO可引起身体多系统损害,其中以脑损害最易。本实验通过建立急性CO中毒动物模型,利用EB具有不能透过BBB的特性,干湿重方法检测脑水肿含水量,通过对脑组织含水量和EB的测定来了解急性CO中毒性脑水肿的时程变化以及BBB通透性改变的情况,采用免疫组化的方法观察不同时间点小鼠内AQP4的表达情况,以了解AQP4表达对急性CO中毒性脑水肿的作用及对BBB通透性的影响。方法:1、健康雄性昆明小鼠84只,按照随机原则分为对照组(空气组)和染毒组(急性CO中毒组),染毒组按伤后时间顺序又分为6个亚组,即伤后6h、1d、2d、3d、7d、14d、21d组,每组6只。其中2只取脑测脑组织含水量,2只测脑组织对EB的通透性,2只灌注取脑做免疫组化检测。2、参照单次腹腔注射法:染毒组小鼠腹腔注射99.9%CO气体,剂量为150ml/kg,空气对照组按同等剂量注射空气。3、从每个亚组中随机选取2只小鼠,造模成功后按每个亚组的相应时间点,称重后用10%水合氯醛麻醉后迅速断头处死,取脑组织行脑组织含水量测定。4、从每个亚组随机选取2只小鼠,于相应时间点前2h经10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉后,经尾静脉注射2%伊文思蓝(EB)2ml/kg,5分钟内推完。2h后断头取脑,用分光光度仪测定淬取液在EB溶液最大吸收峰处得光密度值,依据建立的标准曲线得到淬取液的EB浓度,即可得到单位脑组织中的EB渗出量。5、行AQP4免疫组织化学染色,观察细胞表达数目及蛋白表达变化。结果:小鼠急性CO中毒后6小时脑组织含水量及EB渗出量开始增高,AQP4蛋白的表达也开始增高,在48小时后脑组织含水量、EB渗出量及AQP4蛋白表达量逐渐上升,3天后达到高峰,随后逐渐下降,(p<0.05)有统计学意义。脑组织含水量及EB渗出量与AQP4的蛋白表达呈正相关。结论:急性CO中毒后小鼠脑组织含水量和BBB通透性增高,他们可反映BBB完整性被破坏。急性CO中毒后小鼠脑组织AQP4蛋白表达程度与BBB的通透性有关,同时AQP4蛋白的表达情况、BBB通透性的变化和脑组织含水量之间呈正相关,我们可以推论出急性CO中毒后,AQP4蛋白表达上调可能导致水通道运输的水分子增加和BBB完整性的破坏,导致BBB通透性增高,加重了脑水肿的形成。
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