【摘 要】
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第一部分:人肿瘤坏死因子的蛋白质工程研究.该文采用定点突变的方法构建了两株新型人肿瘤坏死因子突变体MT1(32Trp157Phe)和MT2(2Lys30Ser32Trp157Phe),并在大肠杆菌中得以高
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第一部分:人肿瘤坏死因子的蛋白质工程研究.该文采用定点突变的方法构建了两株新型人肿瘤坏死因子突变体MT1(32Trp157Phe)和MT2(2Lys30Ser32Trp157Phe),并在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的50﹪且为可溶性蛋白.表达产物经蛋白印渍法检测,均能与抗野生型hTNF-α单抗结合且经分离纯化后,样品的纯度在95﹪以上.第二部分:噬菌体展示系统在抗体工程领域的应用研究.第一章、具有芳香酯酯键水解催化活性单链抗体的筛选.该文在传统的获得催化抗体的杂交瘤技术结果阴性情况下,利用噬菌体展示系统从半抗原OBⅡ免疫过小鼠的脾脏中构建单链抗体表达库,库容量达4.6×10<8>.该研究结果表明利用噬菌体展示系统,直接从半抗原免疫小鼠的脾脏中构建抗体库筛选催化抗体的途径是对杂交瘤技术的很好补充.第二章、可催化环氧角鲨烯单环形成的单链抗体的基因克隆及其性质鉴定.该章从分泌可催化环氧角鲨烯单环形成抗体的杂交瘤细胞株25A10中抽提RNA,反转录成CDNA并利用Over-lap PCR扩增出所有单链抗体基因,然后利用噬菌体展示系统经一轮Panning富集到能与半抗原特异性结合的25A10单链抗体基因,并在大肠杆菌中进行了分泌表达,其中40﹪分泌到培养上清,其余滞留在周质空间.第三章、利用热点(Hot Spots)突变的方法提高抗人肿瘤相关抗原Siayl Lewis单链抗体的亲和活性和稳定性.该章利用热点突变的方法对抗人肿瘤相关抗原Siayl Lewis的单链抗体S7轻链CDR3区域的hot spots位点进行了随机突变,结果富集得到了新型突变克隆C4其亲和力经BIACORE检测较野生型提高两倍,稳定性也较野生型在大提高.
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