论文部分内容阅读
目的：研究软坚护肝片(RJHGT)对小鼠化学性肝损伤,免疫性肝损伤、肝纤维化的保护作用及对HSC-T6细胞相关基因mRNA表达的影响。方法：1.昆明种小鼠随机分为正常对照组(NC),损伤模型组,联苯双酯阳性对照组(0.15g/kg),RJHGTH、RJHGTM、RJHGTL(1.24,0.62,0.31g/kg)剂量组。分别采用0.2%四氯化碳(CCl4)300mg/kg对乙酰氨基酚(AP)和800mg/kgD-半乳糖胺盐酸盐(D-GalN)腹腔注射小鼠,建立化学性肝损伤模型。观察胸腺及肝脾重量指数；测定血清AST、ALT、ALP活性及T-AOC;肝组织MDA、SOD、GSH、GSH-PX含量。HE染色观察各组小鼠肝细胞损伤程度。2.采用小鼠尾静脉注射ConA建立肝损伤模型,观察RJHGT对小鼠血清ALT、AST、TNF-α、IFN-γ的活性,肝组织体NO、MDA、GSH含量和SOD活性,HE染色观察各组小鼠肝细胞损伤程度。3.肝纤维化实验中造模组大鼠采用50%CCl4花生油溶液灌胃造模,每周两次,共12周,正常组用花生油代替。于第9周开始,将造模组分为5组分为模型组、扶正化瘀胶囊组、RJHGT H、RJHGT M、RJHGTL组,除正常对照组和模型组外,治疗组每天灌喂软坚护肝片2个月。实验结束后分别观察胸腺及肝脾重量指数；检测大鼠血清中ALT、AST、Alb、HA、PCⅢ的水平和肝组织中Hyp的含量。HE染色观察各组大鼠肝脏纤维程度。4.体外培养HSC-T6细胞,RT-PCR法测定RJHGT对肝纤维化相关基因(TIMP-1、TNF-α、TLR4)表达的影响。结果：1.与模型组比较,RJHGT能降低血清ALT、AST、ALP水平,TNF-α IFN-y活性,肝纤维化诊断指标HA和PCⅢ的含量,提高血清T-AOC和Alb的含量(P<0.05或P<0.01)。2.与模型组比较,RJHGT能降低肝组织中MDA和NO含量；增加肝组织SOD、GSH、GSH-PX活性,降低肝组织中的异常升高的Hyp含量(P<0.05或P<0.01)。3.病理组织学结果表明,RJHGT能够减轻肝细胞损伤程度。4. RJHGT可显著下调TIMP-1、TNF-amRNA的表达(P<0.05),而对TLR4mRNA表达的影响不大结论：1.RJHGT对肝损伤及肝纤维化的发生具有一定的抵抗作用,其机制可能与其抗氧自由基、抑制脂质过氧化作用,降低胶原的合成有关。2.RJHGT可抑制肝星状细胞增殖,并抑制的金属蛋白酶组织抑制因子和炎性因子的生成、促进ECM的降解,这可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。