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【目的】核糖核酸酶III核酸内切酶Dicer1是Micro RNA合成的关键酶之一,主要位于细胞胞质中。在卵巢肿瘤的研究中,卵巢癌患者伴有Dicer1基因的异常调节往往提示预后不良。但是至今有关Dicer1基因如何影响卵巢癌的生物学特性和化疗耐药的研究并不是很清楚。因此本实验的研究主要目的是在卵巢癌细胞株C13K中,下调Dicer1基因可以诱导自噬参与卵巢癌的化疗耐药的探索。【方法】本实验主要的实验方法是:(1)运用细胞增殖与毒性实验(CCK8)来检测下调Dicer1基因后卵巢癌细胞株C13K顺铂的敏感性及半数抑制浓度(IC50)。(2)利用小干扰RNA(si RNA)技术进行下调卵巢癌细胞株C13K中的Dicer1基的表达量和下调Dicer1基因后对顺铂的敏感性以及加入抑制自噬的药物(3-MA)后是否逆转这种耐药效应,其次通过蛋白质印记(western blot)观察Dicer1和自噬相关的关键基因(ATG5,LC3B)在下调Dicer1基因后卵巢癌细胞株C13K的表达量以及下调Dicer1基因并且顺铂处理后凋亡蛋白(Caspase3,c-PARP)的表达量。(3)通过透射电子显微镜及共聚焦激光扫描显微镜技术,来观察Dicer1基因下调以及顺铂处理后卵巢癌细胞的自噬体的变化。(4)通过流式细胞学实验技术,来观察Dicer1-si,ATG5-si以及顺铂处理后细胞凋亡的情况。(5)通过运用公共数据库TCGA,我们研究了Dicer1基因和ATG5基因在卵巢癌病人中的表达与预后的关系。【结果】根据以上实验数据及现象,可以得到如下结果:(1)通过CCK8发现卵巢癌细胞株C13K在Dicer1基因下调后对化疗药物顺铂的耐药性增加。(2)通过si RNA干扰和western blot发现下调Dicer1基因在卵巢癌细胞株(C13K)的表达后,凋亡蛋白(Caspase3,c-PARP)表达也降低且加入自噬抑制剂(3MA)可以逆转这种耐药效应。(3)通过透射电子显微镜和荧光共聚焦激光扫描显微镜发现Dicer1下调后以及顺铂处理后,自噬现象比较明显。(4)在TCGA数据库中,发现Dicer1基因表达量低的患者预后较差,自噬基因(ATG5)表达量高的患者预后不良。(5)我们把自噬形成的关键基因(ATG5)沉默以及使用药物抑制自噬生成后,发现C13K对顺铂的敏感性增加。【结论】通过以上实验数据的结果分析,我们可以得出一个这样的结论即在卵巢癌细胞株C13K中,Dicer1下调可以诱导自噬的发生进而促进卵巢癌细胞对化疗药物顺铂的耐药,也许可以为我们以后的临床实践提供一种新的治疗策略。