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器官保存是移植的三大技术支柱之一。为了缓解供器官短缺的矛盾和不断提高患者长期存活率,移植临床对器官保存技术提出了更高的要求。单纯静态低温保存仍然是最简便和常用的器官保存方法,单纯低温保存中常使用的器官保存液包括HTK(Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate)液、Celsior液和UW(University of Wisconsin)液。其中UW液可以成功保存犬肾脏在72小时以上,保存肝脏在30小时左右,是器官保存液的金标准,但是其成分复杂、价格昂贵,配方存在两高问题:高钾、高粘滞度,而且使用中暴露出一些缺点,不能完全适应临床需要。 国内目前大器官移植、多脏器联合移植迅速开展,但是迄今还没有成功研制出国产长效多器官保存液,无法满足日益增长的移植临床需要。实现多器官保存液的国产化是我国器官保存研究的重点,因此我们在吸取国内外器官保存液的优点的基础上,配制了自制多器官保存液(SMO液),并通过离体犬肾低温保存期间皮质形态学改变、线粒体功能改变以及保存期间肾皮质细胞能量代谢的测定,研究其对犬肾脏的低温保存效果。 实验目的: 1、建立犬离体肾脏单纯低温保存模型,在低温保存的各时点,对光镜和电镜下的肾皮质细胞的水肿、胞质空泡化、肾小管坏死、线粒体水肿、嵴破坏等形态学指标进行描述性研究,比较不同保存液组肾皮质显微和超微结构变化,特别是线粒体在低温保存中的损伤程度。同时检测保存期间皮质细胞凋亡的发生,了解低温缺氧损伤中细胞凋亡的规律,及不同保存液对低温诱导的肾皮质细胞凋亡的影响。 2、离体犬肾低温保存期间,分离得到肾皮质线粒体,检测线粒体功能的改变,主要包括线粒体呼吸控制率(RCR)和磷氧比(P/O),借此反映保存期间呼吸链的整体活性和细胞氧化磷酸化生成ATP的效率。通过检测线粒体功能结合线粒体超微结构的改变,可间接反映低温保存期间线粒体通透性(MPT)的改变,