重组猪γ干扰素对蓝耳病的防治及疫苗免疫效果的影响

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Rosa1201
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干扰素(Interferon,IFN)于1957年由Issacs和Lindeman首先发现,是细胞分泌的一类具有高度生物学活性的糖蛋白,具有广谱的抗病毒、抗肿瘤、抗细胞增殖和免疫调节等功能。干扰素可用于治疗肿瘤,抑制RNA肿瘤病毒及DNA肿瘤病毒的增殖;具有比较强的免疫调节作用,可以调节T、B淋巴细胞的免疫功能;此外,干扰素具有比较强的佐剂活性并能有效地降低副反应的影响,从而能对疫苗的免疫产生增效作用。猪干扰素是研究最早的动物干扰素之一,20世纪80年代就有猪干扰素的相关报道。近年来,对于干扰素的诱导条件和理化活性有了进一步的研究,同时对猪干扰素进行了大量的临床试验。猪干扰素是预防和治疗猪病毒性疾病的一种有效的广谱抗病毒药物,也是是当代生物技术药品中研究最为广泛的生物激活素。  干扰素分为三类:IFN-α、IFN-β和IFN-γ。其中,IFN-α与IFN-β具有相似的生物学活性,统称为Ⅰ型干扰素,IFN-γ属于Ⅱ型干扰素,几乎所有的脊椎动物都可产生这两类干扰素,但生物学活性有明显的不同。IFN-α、IFN-β主要是对病毒感染的应答产生的,能诱导机体抗病毒蛋白的产生,从而发挥抗病毒作用,治疗动物的病毒性疾病,也可以与疫苗配合使用,增强免疫效果。IFN-γ/主要由活化的T细胞和NK细胞产生,在机体的免疫系统中发挥重要作用,在治疗病毒性疾病和作为疫苗佐剂方面具有良好的应用前景。本课题通过应用重组猪IFN-γ研究其对仔猪免疫指标的影响以及对蓝耳病的预防效果,证明猪IFN-γ的细胞免疫和抗病毒作用。同时将猪IFN-γ应用于蓝耳病疫苗的免疫增强试验,并与市场上的相似产品进行免疫效力的对比。  选35日龄健康仔猪20头,随机分为4组。第1组为对照组,肌肉注射5 mL生理盐水;2~4组为试验组,分别肌肉注射腺病毒表达的猪γ干扰素(rAd-PoIFN-γ)、酵母表达的猪γ干扰素(pPICZαC-PoIFN-γ)和猪白细胞干扰素注射液,注射剂量为40万单位/头。分别于干扰素注射前及注射后1、3、7、14 d进行采血,分离血清,研究PoIFN-γ注射液对猪血清中IL-2、IL-12以及IFN-γ含量的影响。结果表明,B~D组血清IL-2、IL-12含量在1、3、7、14 d都显著高于A组(P<0.01),C组血清IL-2含量显著高于其他各组(P<0.05),B组在第3、7、14 d血清IL-12含量显著高于其他各组(P<0.05)。B~D组血清IFN-γ含量在第7 d和第14 d都达到较高水平,其中,B组在第14d显著高于其他各组(P<0.05);C组和D组差异不显著(P>0.05)。试验表明,注射一定剂量的猪γ干扰素增强了试验猪的细胞免疫功能。  试验猪第14 d采血后,B~D组试验猪肌注三种猪γ干扰素,注射剂量为40万单位/头,A组注射等量的生理盐水。24 h后均用PRRSV分离株攻毒,进行颈部肌肉注射,攻毒剂量为2 mL(2×103.67TCID50/mL)。攻毒后每隔12 h测量猪只的体温,观察采食、精神及皮肤的变化,出现死亡的时间和死亡猪的数量。观察期为35天。试验期间发生疾病,兽医师按照农业部颁布的有关技术规范,如《高致病性PRRS防治技术规范》等对疑似病猪进行临床观察及解剖诊断,并采用PoIFN-γ+抗生素及抗病毒中西药对症用量和天数治疗至康复。根据疾病预防,治疗率等项目统计试验结果,进行显著性比较和分析。  选35日龄健康仔猪30头,随机分为6组,第1组为对照组,2~6组为试验组。试验组均免疫PRRSV疫苗1头份,同时第1组分点肌注生理盐水5 mL/头;一免后7 d进行二免,同时2~5组分别肌肉注射40万单位/头的重组猪α干扰素(rPoIFN-α)、腺病毒表达的γ干扰素(rAd-PoIFN-γ)及酵母表达的γ干扰素(pPICZαc-PoIFN-γ)注射液5 mL和黄芪多糖注射液5 mL,研究PoIFN-γ作为免疫佐剂对PRRSV疫苗血清ELISA抗体产生的影响。结果显示,免疫PRRSV疫苗后第14 d,2~6组ELISA抗体水平显著高于第1组,且第4组和第5组ELISA抗体水平显著高于其他各组(P<0.05);第21 d,4组ELISA抗体水平显著高于其他各组(P<0.05);从21 d开始到第42 d,3组和4组ELISA抗体水均显著高于其他各组(P<0.05),至试验结束,血清中抗体仍维持较高水平。整个试验期,试验组血清ELISA抗体水平均高于对照组。试验表明,肌肉注射一定剂量PoIFN-γ可促进PRRSV疫苗血清抗体的产生,增强疫苗免疫效果。  综上所述,本研究应用重组猪γ干扰素进行蓝耳病的防治和蓝耳病疫苗免疫效果影响试验,结果证明其有良好的抗病毒作用和免疫增强效果,为猪干扰素在猪疫病上的进一步应用奠定了坚实的基础。  
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