微型月季微繁体系的构建及组培生根机理研究

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本文在综述国内外有关微型月季(Rosa chinensis. Minima或Rosa.roelletti)研究进展的基础上,以几个花色具代表性的微型月季品种为试材,研究了培养基成分及培养条件对微型月季组织培养中无菌系的建立、增殖与壮苗,瓶内生根与驯化及瓶外生根技术进行了系统的研究,同时还对微型月季的组培生根机理进行了初步探讨。 试验表明:以开花枝下具完整叶、带腋芽的茎段为外植体(外植体长度/直径组合为9.0~10.0mm/3.0-3.5mm,茎节上下各带5.0mm亲本组织)有利于腋芽诱导,将外植体用100mg/L庆大霉素溶液浸泡30分钟可有效防止内生菌污染。灭菌后接种于100ml三角瓶,每瓶接种4-9个外植体。诱导培养基为MS+6-BAlmg/L+NAA0.1~0.2mg/L+KT0.5mg/L,接种后先暗处理2天,然后转入1600—2000Lux的光强下培养,光照16小时。培养温度为20℃。 将腋芽再生芽转入MS+6-BA3~5mg/L+NAA0.1~0.2mg/L+蔗糖(生产上可用白砂糖)30~35g/L+琼脂6~6.5g/L的培养基上,培养基的pH值调至5.9。培养温度为22℃,光照800~1600Lux,光照16小时。在以后的继代增殖中以3芽为一转接单位有利于增殖。 将增殖和壮苗培养后的苗(苗高约20~25mm)转入1/2MS(将Ca2+浓度提高到1.5倍)+NAA0.2mg/L(或NAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L)+蔗糖20~25g/L+琼脂7g/L+活性炭0.4g/L的生根培养基中,培养基的pH值调至6.0。培养温度在转接后的第一周为22℃,然后逐渐降到18℃。培养容器以试管最佳,生产上可用广口瓶。其它培养条件同上。 将培养6~8周、20~25mm高的苗取出,洗净基部琼脂后浸入50g/L的IBA溶液中5分钟,然后插入由蛭石和粗沙按1:1(v/v)混合而成的基质中,于自然散射光下培养,培养温度22℃。21天后将驯化成活的苗移入由园土、蛭石和珍珠岩按!:1:1(V/v/v)混合而成的基质中,其它栽培条件同驯化条件,并逐渐过渡到自然条件。 在瓶内、瓶外生根苗的比较研究中发现,不同的生根方式对植株生长发育的影响较大。经两种生根方式处理ZI 天后,瓶外所生的根较长、数量较多、横截面积较大,其中维管柬所占的比重较大,且维管束发育早,根的韧性好、白色、有侧根;而瓶内所生的根较细、易碎、黑色、没有侧根。除‘小红’外,所有瓶外生根的植株其根(横截面积和干重)和茎(高度、横截面积和干重)的生长量均比瓶内生根的植株多。所有瓶外生根的植株产花量增加,花期提前。 0 通过对微型月季组培苗生根过程中内含物的阶段性测定发现,生根部位的IAA含量在根原基出现前增加,而根原基出现后下降;iPAs和ZRs在根原基出现前略有下降,而在根原基出现后的分化过程中急剧上升;可溶性糖和淀粉在根原基出现前积累,而根原基出现后因消耗含量下降;可溶性蛋白在根原基发生和分化的过程中增多,而在根原基分化后根的伸长过程中含量下降;POD活性在根原基发生和分化的过程中增强,而在根原基分化后根的伸长过程中活性降低:外源IAA处理会加强以上指标的变化强度,从而有利于生根。因此,在组培苗的生根过程中,根原基的形成为生长素所刺激,而在根原基的分化和根的伸长过程中需低浓度的细胞分裂素与生长素配合,可溶性糖和淀粉等碳水化合物为根原基的分化和根的生长提供能源,在根原基的发生和分化过程中还伴随着一系列的生理生化变化,使蛋白质含量和酶活出现阶段性变化。
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