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产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起发展中国家的婴幼儿和到这些地区旅行者发生腹泻的主要致病因素。ETEC每年都可导致全球数亿人次的腹泻,以及数十万的5岁以下儿童的死亡,同时还可导致很多患儿因为营养不良而发生的发育迟缓。因为细菌性腹泻非常容易通过粪口途径传播而引起流行,因此虽然可以使用抗生素来治疗,但近几年来也出现耐药性,使抗生素失去了治疗作用。所以,构建一个有效的产肠毒素大肠菌疫苗来加强ETEC腹泻的特异性免疫预防显得非常重要。根据国内外的文献报道,有两种致病因子参与了腹泻的发病的过程,它们分别是定居因子抗原(colonization factor antigens,CFAs)和肠毒素(enterotoxins)。大肠杆菌的的定居因子抗原有很多种类型,最常见的是定居因子抗原I (CFA/I)、定居因子抗原II (CFA/ II)和定居因子抗原IV (CFA/ IV) [1]。而CFA/I是一种血清优势定居因子,在腹泻的发病过程中发挥了非常重要的作用。本研究就是以双歧杆菌-CFA/I为免疫增效剂,研究它对OVA的免疫增效的作用。目的:将已构建好的CFA/I的双歧杆菌重组疫苗(即pBEX-CFA/I)和卵清白蛋白(OVA)共同免疫SD大鼠,检测pBEX-CFA/I对OVA的粘膜免疫有无增效作用,同时与天然双歧杆菌进行比较,观察它们之间的差异,进而观察空肠的粘膜,粘膜下层,肠腺腺腔内以及肠腺之间抗体分泌细胞的分布。方法:(1)用重组双歧杆菌疫苗免疫SD大鼠:将SD大鼠随机分成5组,即PBS空白对照组、卵清白蛋白(OVA)组,双歧杆菌+OVA组,pBES-CFA/I+OVA组和pBES-LTB+OVA组。每组12只,各组大鼠分别在第0、7、14、21天灌胃免疫后,收集长约3cm的空肠,通过免疫组织化学技术和Qwin图像处理系统,对空肠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的定位进行系统分析,研究注射pBES-CFA/I+OVA后对SD大鼠在不同时期空肠中sIgA阳性细胞分泌的影响。(2)在收集空肠的同时,采集血和粪便样本用ELISA检测其特异性sIgA和IgG水平。(3)在第28天,在PBS对照组,pBES-CFA/I组和pBES-LTB组随机抽取三只大鼠,麻醉后将空肠结扎成4段,每段长3.0cm,分别注射0.2ml ETEC H10407菌液及0.2ml纯化的LT,观察空肠的充盈情况,检测免疫增效作用。结果:(1)在免疫后的SD大鼠的空肠内均产生了特异性的分泌型抗体sIgA,其中pBES-CFA/I+OVA组和pBES-LTB+OVA组显著高于其它组(P<0.05)。(2) ELISA结果说明,大鼠经pBES-CFA/I+OVA和pBES-LTB+OVA免疫后比其它免疫组和PBS组产生了更强烈的血清IgG和粪便IgA抗体(P<0.05)。其它免疫组间差别无统计学意义(P>0.05)。(3)肠袢试验结果表明:pBES-CFA/I+OVA组和pBES-LTB+OVA组的大鼠的空肠内无明显的液体充盈。PBS空白对照组有不同程度的液体充盈。结论: pBES-CFA/I和pBES-LTB分别与OVA共同经胃肠道粘膜免疫可诱导有效的免疫增效作用,增强疫苗的免疫效果,能够进一步适用于人体。