【摘 要】
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日本沼虾(Macrobrachium nipponense)是重要的淡水养殖虾类,因其经常遭到病原体侵染而造成巨大的经济损失,因此对日本沼虾的免疫系统中免疫机制的研究具有重要的意义。本实验
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日本沼虾(Macrobrachium nipponense)是重要的淡水养殖虾类,因其经常遭到病原体侵染而造成巨大的经济损失,因此对日本沼虾的免疫系统中免疫机制的研究具有重要的意义。本实验室研究过一条日本沼虾硫氰酸生成酶序列(MnRHOD1),利用该序列在日本沼虾转录组中检索到4条相似序列,分别命名为MnRHOD2、MnRHOD3、MnRHOD4、MnRHOD5。本研究成功诱导并表达了日本沼虾硫氰酸生成酶MnRHOD2--MnRHOD5,并检测其对应的融合蛋白的活性,4个成功诱导表达的蛋白都有酶活特性。4条基因的表达模式各不相同,MnRHOD2、MnRHOD3、MnRHOD5基因在肝胰腺中相对表达量最高,而MnRHOD4在鳃中表达量最高;MnRHOD2、MnRHOD4、MnRHOD5这三个基因在维氏气单胞菌刺激后都呈现出上调趋势,MnRHOD3呈现出下调的趋势。为验证日本沼虾硫氰酸生成酶基因是否与氧化应激相关,我们用RNAi的方式将MnRHOD2敲低,MnRHOD2敲低后ROS(活性氧)和MDA(丙二醛)的水平都升高了。进一步在细菌中验证日本沼虾硫氰酸生成酶2是否有抗氧化性,在对抗吩嗪硫酸甲酯(PMS,氧化应激激活剂)产生的氧化胁迫时,随着PMS浓度的升高,重组表达菌E.coli中该基因活性位点突变后存活数量明显不如活性位点突变前的重组菌株。初步证实了硫氰酸生成酶2具有抗氧化应激的作用。
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