金黄色葡萄球菌fur基因缺失株构建及其功能研究

• 作 者: 薛东力
• 机 构: 内蒙古医科大学
• 出 处: 内蒙古医科大学
• 发表日期: 2017年期
• 关键词: 葡萄球菌 增殖活性 菌株鉴定 基因表达

目的：探究铁吸收调节蛋白fur对金黄色葡萄球菌体外增殖活性试验、溶血活性、体外侵袭力以及毒力基因、代谢和耐药相关基因表达的影响，为进一步阐明fur在调控金黄色葡萄球菌致病性中的作用提供新的实验依据。　　方法：⑴fur基因缺失株的构建：以金黄色葡萄球菌Newman株为研究对象，通过基因同源重组技术构建fur基因缺失株，并进行鉴定。⑵采用体外增殖活性试验，观察野生株、fur基因缺失株之间生长速率的差异。⑶采用抗生素保护试验，比较Newman野生株、fur基因缺失株之间体外侵袭力的差异。⑷采用溶血活性试验，观察Newman野生株、fur基因缺失株之间溶血活性差异5.提取Newman野生株和fur基因缺失株全基因组RNA进行RNA测序，观察野生株和缺失株之间毒力基因、代谢和耐药相关基因表达特征的差异。　　结果：①通过构建T载体并与pKOR1质粒进行连接，成功构建分子量大小为2000bp的过渡质粒，进一步经后续抗生素抗性筛选获得fur基因缺失株，并经基因测序得到验证。②体外增殖活性试验：观察到野生株2h后开始进入对数生长早期，8h后进入平台期。在体外培养2h、4h、6h、8h、10h和12h， Newman野生株的增殖率均明显高于缺失株（P＜0.05）。③万古霉素保护试验：Newman野生株对A549细胞株的侵袭能力明显高于fur基因缺失株（t=4.124,P=0.001＜0.05）。4.溶血活性试验:Newman野生株的溶血活性明显强于fur基因缺失株；④RNA测序：缺失株与野生株相比，上调基因169个，下调基因313个，其中毒力基因clfA、capA、capB、capC、capD、capP、ebpS、lytM等上调，hla、lukF、lukS、hlgA、hlgB、hlgC、clfB、fnbA、fnbB等下调。　　结论：⑴金黄色葡萄球菌Newman野生株体外增殖活性、溶血活性和体外侵袭力明显高于fur基因缺失株，提示fur对金黄色葡萄球菌多种生物学具有重要调控效应。⑵fur基因缺失株多种毒力基因、代谢和耐药相关基因表达水平发生显著变化，fur对这些基因的调控机制有待进一步探究。