论文部分内容阅读
凋亡是机体一种正常的生理现象，对维持机体的发育和代谢发挥重要作用。凋亡的过程如果发生异常会导致疾病的发生，肿瘤便是一种凋亡异常性疾病。近年来研究显示凋亡在肿瘤的发生、发展及最终的浸润转移中发挥重要作用。肿瘤的一个重要标志是对正常凋亡信号的耐受，主要是凋亡通路中一些关键蛋白表达异常或其编码基因突变所致，因此可通过调节这些蛋白的功能和表达来增强肿瘤细胞对凋亡信号的敏感性，从而达到诱导细胞凋亡抑制肿瘤生长的目的。目前，大部分的抗肿瘤药物主要是基于对凋亡通路上游调控蛋白的研究，而对通路下游效应蛋白的研究则比较少，深圳湘雅生物医药研究院以效应蛋白为靶点合成了新型小分子化合物A0801。本文拟以该化合物为研究对象，研究其对肿瘤细胞的作用，并初步探讨其作用机制。
研究目的：观察化合物A0801对白血病细胞株（HL-60和K562）、人肺腺癌细胞株（A549）、人肝癌细胞株（HepG-2）及人神经母细胞瘤细胞株（SK-N-SH）的增殖抑制作用，并初步探讨其作用机制。
研究方法：通过MTT法分别观察A0801对HL-60、K562、A549、HepG-2及SK-N-SH等细胞增殖的影响；采用瑞氏-吉姆萨（瑞-吉）和Hochest-33258染色观察HepG-2细胞形态的变化；酶活性检测方法研究化合物A0801对caspase-3活性的影响；RT-PCR检测HL-60和HepG-2细胞经A0801作用不同时间凋亡相关基因Bcl-x1、Survivin mRNA的表达；流式细胞术检测A0801对HL-60和HepG-2细胞周期的影响。实验结果：（1）MTT实验结果显示，与正常人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMNC）相比，A0801能够显著抑制肿瘤细胞的增殖，且呈明显的时间-剂量依赖性，尤以对HL-60细胞的抑制作用最为显著，其24h、48h、72h的IC50分别为2.21±0.47μg/ml、1.50±0.10μg/ml和0.94±0.10μg/ml。（2）HepG-2细胞经A0801处理后，瑞-吉染色显示胞质空泡化，染色质凝集；Hochest-33258染色显示细胞核呈致密浓染或碎块状致密浓染，呈典型的凋亡特征。（3）与对照组0h相比，10μg/ml A0801作用HepG-2细胞24h时，caspase-3活性达到最高；作用48h、72h caspase-3活性虽有下降趋势，但是仍高于对照组。（4）流式细胞术分析显示，与对照组相比，细胞经A0801作用24h后，处于G1期的细胞显著增加，而处于S期和G2期的细胞显著减少。
结论：（1）化合物A0801以时间-剂量依赖方式显著抑制HL-60、K562、HepG-2、A549、SK-N-SH等肿瘤细胞株的增殖，对PBMNC无明显的增殖抑制作用。
（2）化合物A0801可能通过激活caspase-3诱导HepG-2细胞凋亡来抑制其增殖。
（3）化合物A0801可通过将细胞周期阻滞在G1期来抑制HepG-2细胞的增殖。